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常州贺利氏医疗器械有限公司

初始污染菌方法检查验证方案

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初始污染菌检查验证方案

目 录

验证目的

参照标准

验证项目

验证小组及职责

合格标准

试验材料：

菌液制备

菌液计数

培养基的制备

细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证

菌回收率计算公式

结果及结论

验证目的：

建立本公司医疗器械产品表面微生物限度检查方法，本公司产品初始污染菌系采用平皿法现对该方法进行验证，以确认该方法适合于产品表面初始污染菌的检查。

参照标准：2010版中国药典二部附录XIJ微生物限度检查法。

验证项目：本公司医疗器械产品表面微生物限度检查。4.验证小组人员及职责：

验证小组人员:

小组人员职务

姓名

所在部门

职务

组长

巢雪芬

质量部

部门负责人

组员

吴海双

质量部

专职检验员

组员

秦亚芬

质量部

专职检验员

验证人员职责及要求

按验证方案及相关文件实施验证。

认真观察并做好验证原始记录。

对实施验证的结果负责。

验证中各部门的职责

验证领导组职责

制订验证总计划，负责全公司验证工作的管理。

确定验证项目及验证项目负责人。

负责验证方案的批准工作。

负责验证资料及结果的审核工作。

负责验证报告的批准工作。

验证工作小组职责

负责验证方案的起草工作。

参与验证方案的讨论、确认工作。

负责验证方案的实施。

负责验证结果的分析、统计、报告工作。

参与验证结果的评价工作。

质量部职责

负责公司验证日常管理工作。

负责验证方案的审核工作。

负责验证过程中仪器、仪表、计量器具的校验工作。

负责检验仪器及检验方法的验证。

负责验证中各项检测工作，提供验证的检验记录、检验报告，对验证过程中的各项检验工作负责。

负责对验证人员的培训、考核工作。

负责验证资料和报告的审核工作。

负责验证文件回收、归档管理工作。

合格标准：实验组的菌回收率和稀释剂对照组的菌回收率均不得低于70%。

试验材料：

被验证产品：本公司医疗器械产品吻合器

仪器设备：

YXQ-LS-18SI型手自动提式灭菌器

YJ875SDA型净 化台

6.2.3MJX-100B-Z型霉菌培养箱(23～28℃)

HPX-9162MBE数显式恒温培养箱(30～35℃)

202-OA型电热恒温干燥箱

验证用培养基

名称

营养肉汤培养基改良马丁培养基

改良马丁琼脂培养基玫瑰红钠琼脂培养基

验证用菌株：(第 代)

生产厂家

上海中科昆虫生物技术开发有限公司上海中科昆虫生物技术开发有限公司上海中科昆虫生物技术开发有限公司上海中科昆虫生物技术开发有限公司

批号

110429

100415

101203

110526

验证菌株大肠埃希菌

金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌白色念珠菌

黑曲霉菌

培养基营养肉汤营养肉汤营养肉汤

改良马丁培养基改良马丁琼脂培养基

培养温度

30—35℃

30—35℃

30—35℃

23—28℃

23—28℃

培养时间（小时）

18—24

18—24

18—24

24—48

5—7（天）

菌液制备

接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、与枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，于30～35℃培养18～24小时。取经30～35℃培养18~24小时的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、与枯草芽孢杆菌营养肉汤新鲜培养物1ml加入到9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，10倍稀释至10-6~10-7约为50~100cfu∕ml的菌悬液备用。

接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中，于23～28℃培养24~48小时。取经23～28℃培养24~48小时的白色念珠菌改良马丁液体培养物1ml加入到9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，10倍稀释至10-5约为50~100cfu∕ml的菌悬液备用。

接种黑曲霉菌的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上，于23～28℃培养5～7天，加入3～5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨脂80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，用无菌吸管吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%（ml/ml）聚山梨脂80的0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数50～100cfu∕ml的菌悬液备用。

菌液计数：（每种菌液接种2个平皿）

大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌与枯草芽孢杆菌分别取1ml接种至营养琼脂培养基中，置30～35℃培养48小时；白色念珠菌、黑曲霉分别取1ml接种至玫瑰红钠琼脂培养基，置23～28℃培养72小时。

菌落计数结果（2个平皿计数取平均值）见下表

菌落计数结果（cfu∕ml）

10

10-5稀释

10-6稀释

10-7稀释

试验次数

1

2

3

1

2

3

1

2

3