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实验五过氧化物同工酶
PAGE分析
一、目的
一、目的
l掌握聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）技术
的原理和操作方法
l掌握PAGE法分离过氧化物同工酶的原理
和方法
二、原理
二、原理
l聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）
l过氧化物同工酶及活性染色
（一）聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）P
PAGEP
（一）聚丙烯酰胺凝胶电泳（）20
20
1.电泳概念
1.电泳概念
l电泳：带电粒子在电场中向与其电性
l电泳：带电粒子在电场中向与其电性
相反的电极移动的现象。
相反的电极移动的现象。
+
—
+-
○○
-+
○○
（一）聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）
PAGE
（一）聚丙烯酰胺凝胶电泳（）
2.电泳分类
l显微电泳
l自由界面电泳
l区带电泳
–纸电泳
–醋酸薄膜电泳
–琼脂糖凝胶电泳
–聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）
（一）聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）
PAGE
（一）聚丙烯酰胺凝胶电泳（）
3.电泳法原理
在一定条件下，任何带点颗粒都有自己特定的
电泳迁移率。影响电泳迁移率的因素：
l颗粒性质：
–净电荷数目
–颗粒大小
–颗粒形状
l电场强度：V/cm
l溶液性质：
–缓冲液的pH
–离子强度
–溶液黏度
–电渗：液体对固体支持物的相对移
（一）聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）
（一）聚丙PAGE）
烯酰胺凝胶电泳（
4.聚丙烯酰胺凝胶电泳
l聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺（Acr）和交联
剂N,N-甲叉双丙烯酰胺（Bis）在加速剂N,N,N,N-
四甲基乙二胺（TEMED）和催化剂过硫酸铵（AP）
的作用下聚合交联成三维网状结构的凝胶，以此凝
胶为支持物的电泳称为聚丙烯酰胺凝胶电泳
(polyacrylamidegelelectrophoresis，简称
PAGE)
反应过程
反应过程
lTEMED催化AP生成硫酸自由基
SO2－2SO·¯
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l硫酸自由基的氧原子激活Acr单体并形成单体
长链：
lBis将单体长链间连成网状结构：
PAGE法分离蛋白质的三种效应
PAGE法分离蛋白质的三种效应
l电荷效应：各种蛋白质分子所带电荷不同，在
同一电场中泳动率不同；
l分子筛效应；蛋白质分子大小和形状各不相同，
在通过一定浓度（一定孔径）凝胶时受阻力各
不相同，泳动率也不相同；
l浓缩效应：凝胶为不连续系统（凝胶层、pH、
电位梯度均不连续），从而使样品浓缩在一个
极窄的起始区带，即所谓浓缩效应，提高了条
带分辩率。（只有不连续凝胶具有此效应）
（二）过氧化物同工酶及其活性染色（P）
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