生物学策略生产青蒿素.ppt

合成生物学策略生产青蒿素生工1201金龙斌

背景介绍：一种因战争而生的抗疟药2023年23日国际医学大奖——美国拉斯克奖临床研究奖授予中国中医科学院终身研究员屠呦呦，以表彰她“发现了青蒿素——一种治疗疟疾的药物，在全球特别是开展中国家挽救了数百万人的生命〞。黄花蒿〔ArtemisiaannuaLinn〕又叫黄蒿，是菊科蒿属的一年生草本植物，广泛分布在国内各省。为中国传统中草药。其有效成分—青蒿素在抗疟方面与传统的奎宁类抗疟药物具有不同的作用机理。“青蒿一握，水一升渍，绞取汁尽服之〞。《肘后备急方》青蒿素是从植物黄花蒿茎叶中提取的有过氧基团的倍半萜内酯药物。也是中国发现的第一个被国际公认的天然药物。青蒿素类药物毒性低、抗虐性强，被WTO批准为世界范围内治疗脑型疟疾和恶性疟疾的首选药物。疟疾是经按蚊叮咬或输入带疟原虫者的血液而感染疟原虫所引起的虫媒传染病。寄生于人体的疟原虫共有四种，即间日疟原虫，三日疟原虫，恶性疟原虫和卵形疟原虫。在我国主要是间日疟原虫和恶性疟原虫。呦呦鹿鸣，食野之蒿。我有嘉宾，德音孔昭。

传统青蒿素的提取：80年代以来，青蒿素的化学合成、生物合成及组织培养相继成功，但由于受率低、本钱高而难以投入工业化生产，目前青蒿素来源主要是从青蒿中直接提取得到；或提取青蒿中含量较高的青蒿酸，然后半合成得到。然而青蒿素含量随产地不同差异极大。除中国重庆东部、福建、广西、海南局部地区外，世界绝大多数地区生产的青蒿中的青蒿素含量都很低，无利用价值。

关键酶基因的研究进展。底盘细胞选择与构建。工程菌目的产物的提高措施合成生物学策略

青蒿素生物合成路线

01真核微生物01原核微生物01植物细胞底盘细胞的选择2003年，美国Keasling小组将青蒿ADS基因经密码子优化后导入大肠杆菌中表达，首次在细菌体内合成出青蒿素的第一个关键前体——紫穗槐-4,11-二烯。2006年，Keasling小组将ADS基因连同CYP71AV1和CPR基因同时导入酿酒酵母中表达，培育出世界上第一株生产青蒿酸的酵母工程菌，经代谢途径修饰与优化，其产率已达153mg/L，加拿大的一支队伍于08年将新克隆的青蒿DBR2基因连同ADS，CYP71AV1和CPR基因一同导入酿酒酵母，率先培育出合成双氢青蒿酸的酵母工程菌。美国肯塔基大学将青蒿ADS基因及鸟类FPS基因导入烟草中表达，经叶绿体信号序列引导，ADS和FPS被转运至叶绿体，并合成紫穗槐-4,11-二烯。

底盘细胞代谢途径设计只导入青蒿素合成特异途径中的基因，利用底盘细胞中固有的底物供给途径，到达制备青蒿素中间体的目的。除了导入青蒿素合成特异途径中的基因外，还导入了底物供给途径的限速酶基因。除了导入青蒿素合成特异途径中的基因外，另外导入一条底物供给途径。

工程菌目的产物提高措施一：启动子修饰。四：密码子优化二：增加基因拷贝数五：基因替换三：选择不同区室六：增加辅酶数量七：优化培养和生产条件

酵母菌合成青蒿素为了在酵母菌体内实现该流程，对酵母菌进行了2个方面的基因工程改造。

青蒿酸分离提纯混合培养物细胞体沉淀物碱性清洗缓冲液HCL调PH醚抽提抽提物凝胶柱层析纯度大于95%的青蒿酸

前景展望：通过合成生物学制备青蒿素，不受环境和土地的制约,能在短时间内获得大量的青蒿素，能稳定世界市场上青蒿素的供给，有效地降低青蒿素的价格，有利于控制疟疾在贫困国家的肆虐。通过合成生物学制备青蒿素的成功经验和技术能为其他化工产品、能源和材料的合成生物学研究提供借鉴作用。

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