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利用母血胎儿游离DNA检测胎儿遗传信息的应用进展2023

目前临床广泛开展的产前诊断技术主要是侵入性产前诊断技术，包括妊娠早期(7~11周)绒毛活检技术、妊娠早中期胚胎(胎儿)镜检查技术、妊娠中期羊膜腔穿刺取样技术、妊娠中晚期脐静脉穿刺胎血取样技术等，因其创伤性、有一定的流产风险使得有创产前诊断的普及率不高。目前，利用孕妇外周血中胎儿细胞或胎儿DNA开展产前诊断已成为非侵入性产前诊断临床探索的新方向。然而，由于参与母体血循环的胎儿细胞数量极少、母血胎儿有核红细胞含量随孕周变化差异巨大，且分离、提纯、富集胎儿有核红细胞技术复杂、价格昂贵，导致利用母血胎儿细胞检测胎儿遗传信息发展缓慢[1]。而提取孕妇外周血中的胎儿DNA检测遗传信息因方法简便、可靠，已成为产前诊断中发展势头迅猛的领域之一。现对利用孕妇外周血胎儿

DNA遗传信息检测技术开展产前诊断的临床应用新进展进行综述。

一、母血胎儿游离DNA的特性

孕妇外周血胎源游离DNA被认为存在于凋亡细胞DNA断裂后的核小体中(核小体由组蛋白及其伴随的DNA片断组成)。对其来源目前有2种解释：(1)来源于母体损伤及凋亡的胎盘滋养层细胞，较有说服力的例子是子痫前期患者血浆中胎儿游离DNA浓度明显增加，支持该学说的研究较多[2];(2)胎儿细胞在自身造血系统中凋亡后释放入母血[3]。

总之，其来源尚待进一步证实。

早在2001年，Ariga等[4]就发现，在怀有男性胎儿的孕妇中，Y染色体

DNA在细胞组织及非细胞组织中均能被检测到，而且非细胞组织如血浆中DNA含量较细胞组织高许多，且于妊娠7~14周开始出现，在妊娠24周之后稳定升高，于分娩时出现一个高峰，分娩后被迅速清除。系统综述认为，妊娠7周前利用尿液等标本检测孕妇外周血中胎儿DNA是不可靠的[5]。对母亲血浆胎儿Y染色体的检测在妊娠7周时敏感性达到74.5%,特异性达到99.1%;妊娠7~12周时敏感性达到94.8%,

特异性达到98.9%;妊娠13~20周时敏感性可达95.5%,特异

性可达99.1%;妊娠20周以后敏感性达99.0%,特异性达99.6%[5]。

胎源性DNA以小片段形式存在，绝大部分300bp,仅有20%193bp,而血浆中的母源性DNA平均1kb。Kimura等[6]使用Y-短串联重复序列(shorttandemrepeats,STRs)基因座和Y染色体性别决定区(sex-determiningregionofY-chromosome,SRY)基因扩增技术分析孕妇血浆中游离胎儿DNA片段大小，平均值为(286±28)bp,游离胎儿DNA片段大小最多组成2个核小体复合物或更少，不超过3个。该结果进一步证实，提取母血浆胎儿DNA技术简单可行。Muller等[7]发现，孕妇外周血血样在-80℃可保存5d,在此期间时限因素对标本质量影响不大。可见，如果有合适的离心技术，在短期内运送胎源性DNA应用于临

床检测是完全可能实现的。

二、母血胎儿游离DNA常规检测的临床应用

目前国外应用孕妇外周血胎儿DNA的SRY基因对妊娠8周的孕妇开展

胎儿性别检测，技术已经相当娴熟和可靠。

就胎儿血型检测项目而言，欧洲已将利用孕妇血胎源性DNA诊断胎儿RhD基因型列为常规产前诊断项目，可早期评估母胎发生Rh溶血的可能性，必要时及时干预，达到了很好的预防效果。国内报道以预测胎儿血型和母胎ABO溶血为主，使用的基因分型技术主要有聚合酶链反应(polymerasechainreaction,PCR)技术、DNA测序技术、PCR-限制性片段长度多态性、PCR-序列特异性引物和PCR-单链构象多态性分析等方法。复合PCR-限制性片段长度多态性技术对胎儿血型检出率可达82.61%[8];利用PCR-序列特异性引物技术检测胎儿ABO血型基因型，诊断符合率可达88.6%[9]。但妊娠中期预测新生儿ABO血型，符合率低于妊娠晚期的检测结果，该类研究有待进

一步深入。

对怀有男性胎儿的孕妇进行产前诊断具有一定局限性，利用孕妇血浆中父源性微卫星多态性基因开展产前检测是更好的选择，但寻找特异性高的序

列位点仍是未来努力的方向[10-11]。

三、利用母血胎儿