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- 2024-01-13 发布于广东
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逆转录病毒载体
2019版高中生物学选择性必修三说,通常是利用质粒作为载体(vector),将基因送入细胞:
基因表达载体的构建(即目的基因与运载体结合)是实施基因工程的第二步,也是基因工程的核心。其构建目的是使目的基因能在受体细胞中稳定存在,并且可以遗传给下一代,同时,使目的基因能够表达和发挥作用。
载体(Vector)作用,一是用它作为运载工具,将目的基因转移到受体细胞中去;二是利用它在受体细胞内对目的基因进行大量的复制(称为克隆)。最终在受体细胞中表达大量目的基因产物,经分离纯化被人们利用。
作为载体必须具有四个条件:
①在受体细胞中能保存下来并能大量复制;
②有一个至多个限制酶切点,而且每种酶切位点最好只有一个,如大肠杆菌pBR322就有多种限制酶的单一识别位点,可适于多种限制酶切割的DNA插入;
③有一定的标记基因,便于进行筛选。如大肠杆菌的pBR322质粒携带氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因,就可以作为筛选的标记基因。
④对受体细胞无害。
一般来说,天然运载体往往不能满足上述要求,因此需要根据不同的目的和需要,对运载体进行人工改建。现今实际所使用的质粒载体几乎都是经过改建的。
常用的载体主要有两类:
一类是细菌细胞质的质粒,它是一种相对分子质量较小、独立于拟核区DNA之外的环状DNA(一般有1~200kb左右,kb为千碱基对),有的一个细菌中有一个,有的一个细菌中
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