免疫组化操作流程.docxVIP

脱蜡复水：

（1） 石蜡切片浸泡在二甲苯中2次（分别置入两个装有二甲苯的染缸），每次10min;

（2）无水乙醇、95%、85%、75%、50%乙醇、纯水中依次放置5min；

（3） PBS缓冲液中浸泡5min。

抗原修复：

（1） 加入H2O2，湿盒中孵育10min，PBS浸泡冲洗3次，每次5min；

（2） 放入0.01M枸橼酸缓冲液中，微波炉大火加热至沸腾（保持8min）；

（3） 待修复液温度降至室温，PBS冲洗2次，每次5min。

免疫反应：

（1）滤纸擦去多余的PBS，低价PBS稀释的10%正常山羊血清，室温下湿盒封闭30-60min；

（2） 孵育结束后去除封闭液，滴加一抗工作液，4度孵育过夜；

（3） 移去一抗工作液后，用PBS冲洗2次，每次10min，擦去切片周围多余液体；

（4） 滴加二抗工作液，室温湿盒孵育30min，弃去二抗后PBS洗2次，每次10min。

化学染色：

（1）擦去切片上多余PBS，滴加新鲜配置的DAB工作液，湿盒孵育，显微镜检测染色程度；

（2） 染色结束后PBS洗去DAB染液3次，每次5min；

（3） 去除残留液体，苏木素复染25min；

（4） 复染结束后，清水洗去，1%盐酸酒精中风化数秒，再次水洗。

脱水封片：

（1）依次将切片放入50%、75%、85%、95%乙醇和无水乙醇中，各放置

5min；

(2)二甲苯中透明化处理2次，每次10min;

(3)脱水处理后，擦去周围液体，滴加几滴中性树胶，盖上盖玻片，用镊子钝端轻敲盖玻片以除去气泡。