3.2细胞及其组分的分析方法.ppt

翟中和王喜忠丁明孝主编细胞生物学（第4版）Copyright?高等教育出版社2011第二节细胞及其组分的分析方法一、用超离心技术分离细胞组分差速离心：利用不同的离心速度所产生的不同离心力，将各种质量和密度不同的亚细胞组分和各种颗粒分开一、用超离心技术分离细胞组分密度梯度离心：通过离心力的作用使样品中不同组分以不同的沉降率在密度梯度溶液中沉降，形成不同的沉降带二、细胞成分的细胞化学显示方法显色剂与细胞组分中特殊基团的结合通过显色剂在细胞中的定位及颜色的深浅来判断蛋白质、核酸、多糖和脂质在细胞中的分布和相对含量福尔根反应Feulgenstain特异显示细胞内呈紫红色的DNA的分布原理：酸水解可以去除RNA，仅保留DNA，并除去DNA上嘌呤脱氧核糖核苷键的嘌呤，使脱氧核糖的醛基暴露。所暴露的自由醛基与希夫试剂（Schiff’sreagent）反应呈紫红色三、特异蛋白抗原的定位与定性细胞内特异蛋白的显示可通过抗原－抗体特异结合的方法得以实现若抗体偶联荧光染料，则可以通过荧光显微镜、激光共焦显微镜观察为了观察特异蛋白在细胞内的精细定位，抗体需偶联电子致密物(胶体金)，用电镜观察（一）免疫荧光技术直接免疫荧光技术（A）间接免疫荧光技术（B）（二）免疫电镜技术在超微结构水平上研究特异蛋白抗原的定位免疫胶体金技术