猪流行性腹泻病毒部分S基因的原核表达及间接ELISA检测方法的建立的开题报告.docxVIP

猪流行性腹泻病毒部分S基因的原核表达及间接ELISA检测方法的建立的开题报告

一、选题背景

猪流行性腹泻（porcineepidemicdiarrhea，PED）是一种高度传染性的病毒性肠炎，目前在全球多地造成了严重的经济损失。PED的病原体为PED病毒，属于冠状病毒科，病毒基因组含有若干个开放阅读框（openreadingframe，ORF），其中S基因编码了病毒表面的刺突蛋白，是PED病毒的重要免疫保护抗原。因此，S基因是PED病毒的重要研究对象，目前已有多篇研究报道了PED病毒S基因的克隆、表达、抗原性等方面的研究。

为了更好地研究PED病毒S基因的免疫学特性，需要建立一种简便快捷、灵敏度高、特异性好的检测方法。本选题将从PED病毒S基因的原核表达及其免疫学检测方法的建立两个方面入手，以期为PED病毒的免疫学研究提供一定的理论和方法基础。

二、研究内容

本研究拟开展以下两个方面的内容：

1.PED病毒S基因的原核表达

利用PCR技术从PED病毒基因组中扩增出S基因，设计引物，构建重组质粒，将S基因克隆到原核表达载体pET28a(+)上，利用大肠杆菌BL21(DE3)进行原核表达。通过SDS和Westernblotting分析重组蛋白的表达情况，并对表达的重组蛋白进行纯化和鉴定，以获取高纯度的PED病毒S蛋白。

2.PED病毒S蛋白的间接ELISA检测方法的建立

利用本研究获取的高纯度PED病毒S蛋白，通过对不同浓度的S蛋白进行包被，优化ELISA反应条件，建立PED病毒S蛋白的间接ELISA检测方法。通过对半衰期、灵敏度、特异性等指标的评价，对所建立的检测方法进行验证。

三、研究意义

本研究将建立PED病毒S基因的原核表达及其间接ELISA检测方法，为PED病毒的免疫学研究提供重要的手段与方法，并对PED病毒的疫苗研制、诊断与防控等方面具有指导意义。同时对于病毒学、免疫学、生物技术等领域也将有一定的学术贡献。