DB63T 1943-2021乐都紫皮大蒜脱毒繁育技术规范.docxVIP

ICS65.020.20

CCSB31

青海

省地

DB63

方标准

DB63/T1943—2021

乐都紫皮大蒜脱毒繁育技术规范

2021-08-18发布

2021-09-20实施

青海省市场监督管理局发布

I

DB63/T1943—2021

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

本文件由青海省农业农村厅提出并归口。

本文件起草单位：青海大学。

本文件主要起草人：梁健、洒威、王乐、王煜伟、殷恒霞、尙千涵、尹卫、岳苗、仲文祥、李小飞、王其才。

本文件由青海省农业农村厅监督实施。

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DB63/T1943—2021

乐都紫皮大蒜脱毒繁育技术规范

1范围

本文件规定了乐都紫皮大蒜脱毒繁育的培养基、外植体、接种、培养、病毒检测、驯化与培育等技术要求。

本文件适用于乐都紫皮大蒜的脱毒繁育。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

NY/T405脱毒大蒜种蒜(苗)病毒检测技术规程

3术语与定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

乐都紫皮大蒜(AlliumsativumL.)

又名乐都红皮大蒜；系百合目，百合科，葱属，是青海优良地方品种。

4培养基

根据初代培养、增殖培养、分化培养、生根培养、诱导培养的营养需求配制培养基。培养基配制表

见附录A。

5外植体

5.1外植体选取

选取种性纯正、生长势强、具有代表性的乐都紫皮大蒜作为脱毒外植体进行田间标记，采收后的鳞茎于室温通风条件下单独保存。

5.2外植体处理方法

将鳞茎于0℃~5℃冰箱冷藏35d，打破休眠。

6接种

2

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6.1茎尖消毒

选取无病斑的鳞茎，剥去外皮，自来水冲洗30min后，切取体积约1cm×1cm×1cm的茎尖。将茎尖转移至超净工作台内，75%的酒精消毒1min，蒸馏水冲洗3次~4次。再使用20%的次氯酸钠消毒10min，蒸馏水冲洗3次~4次。无菌滤纸吸干茎尖表面水分，置于无菌培养皿中备用。

6.2茎尖剥离

在40倍解剖镜下剥去茎尖幼叶，直至露出光滑茎尖，用解剖刀切取含茎尖的生长点2mm~3mm。

6.3接种

用手术镊将生长点移至初代培养基上，每个培养瓶接种4块~6块。酒精灯上烘烤瓶口和瓶盖，在培养瓶壁上注明产地、编号和接种日期等内容。

7培养

7.1培养条件

培养温度24℃~26℃，光照强度2000Lx~3000Lx、每天光照14h~16h，相对湿度60%以上。7.2初代培养

培养7d~12d，待茎尖形成嫩黄颗粒状愈伤组织。

7.3增殖培养

将愈伤组织转移至增殖培养基，培养14d，待形成直径3cm左右愈伤组织团。

7.4分化培养

将颗粒状愈伤组织团用手术刀分割成0.3cm~0.5cm方块，接种于分化培养基，培养21d，待分化出浅绿色不定芽，转移到新配制的分化培养基，培养直径至1.5cm~2cm。

7.5生根培养

经7.4培养后，将新个体切割成1cm转接至生根培养基上，培养21d，待长出幼根和幼叶，形成初代苗。

7.6诱导培养

将初代苗转入诱导培养基进行培养，30d~60d后，培养瓶内形成脱毒小鳞茎。

8病毒检测

小鳞茎中洋葱黄矮病毒(OYDV)、大蒜普通潜隐病毒(GCLV)的检测按照NY/T405执行。

9试管苗驯化与管理

9.1驯化前处理

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打开瓶塞，加入自来水，室内敞开放置5d进行炼苗。取出脱毒苗，洗净培养基，保湿待栽。

9.2移栽

将脱毒小鳞茎移栽至装有基质(珍珠岩:蛭石:草炭土=1:1:0.5)的营养钵中，置于室内，浇透水一次。

9.3管理

9.3.1光照管理

移栽后遮阴10d~15d,此后逐渐增加光照强度。

9.3.2温度管理

室温保持在20℃~25℃，基质温度保持在15℃~20℃。

9.3.3水肥管理

根据空气温湿度和基质含水量适时浇水，使基质相对含水量保持在70%~80%，空气湿度保持在50%~60%。每隔7d左右浇灌一次营养液，营养液使用MS基础培养基配制，稀释10倍后浇灌。

4

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AA

附录A

(规范性)

培养基配制表

培养基配制见表A.1。

表A.1培养基配制表

成分

初代培养基

增殖培养基

分化培养基

生根培养基