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1Chapter3细胞生物学研究方法

23.1显微镜技术光学显微镜：以可见光〔或紫外线〕为光源。电子显微镜：以电子束为光源。肉眼：0.2mm;光镜：0.2μm;电镜：0.2nm

33.1.1光学显微镜技术1.普通光学显微镜技术相差显微镜技术微分干预差显微镜技术5.暗视野显微镜技术5.荧光显微镜技术6.激光扫描共聚焦显微镜技术

41.普通光学显微镜〔TheLightMicroscope〕1)结构显微镜的分辨力由哪局部决定？

5分辨率R=0.61λ/NANA〔数值孔径〕λ=照明光源的波长，白光约为500nm。如40/0.65100/1.4R=0.61λ/NA=0.2?m2〕性能指标

63〕总放大率：

物镜的放大倍数X目镜的放大倍数

目镜的放大倍数：10X16X

有效放大率：

所用物镜数值孔径的500-1000倍.

空放大：在有效放大外，属于空放大。微细结构分辨不清。

任何显微镜而言，最重要的是其分辨力！

而不是它的放大倍数。

74)目镜的作用：与显微镜的分辨率无关，它只是把物象第二次放大，使眼睛便于观察。目镜只能将物镜已经分辨的影像进行放大，无法观察到未被物镜分辨的细节。问题：使用40/0.65物镜时，应选配适宜目镜5〕应用：经过固定染色后，切片标本的观察。

8移动臂蜡或树脂包埋的样品切片用钢刀样品切片蜡带伸展在盖玻片和载玻片之间的切片切片机石蜡切片样品制备：1).固定；2).脱水、包埋；3).切片；4).选择性染色；5).观察。固定剂〔甲醛〕乙醇脱水二甲苯石蜡包埋

9VWAp27TUNEL

10染色细胞未染色细胞光线通过染色的细胞，振幅变低。光线通过未染色的细胞，振幅不变，但相位发生改变。利用光衍射和干预特性，通过添加物镜后焦面上相板和聚光镜上的环状光栅，使相位差变为振幅差，提高明暗比照。2.相差显微镜(phasecontrastmicroscope)

11在构造上，相差显微镜有不同于普通光学显微镜两个特殊之处。环形光阑〔annulardiaphragm〕：位于光源与聚光器之间。相位板〔annularphaseplate〕：物镜中加了涂有氟化镁的相位板，可将直射光或衍射光的相位推迟1/4λ。

12Figure3-2.Interferencebetweenlightwaves.Whentwolightwavescombineinphase,theamplitudeoftheresultantwaveislargerandthebrightnessisincreased.Twolightwavesthatareoutofphasepartiallycanceleachotherandproduceawavewhoseamplitude,andthereforebrightness,isdecreased.

13衍射光的相位比直射光推迟?1/4波长明反差〔负反差〕：将直射光推迟1/4入，使直射光和衍射光，维持同一相位，由于干预现象，合成光的振幅是二者振幅之和，而背景只有直射光，所以被检物体比背景亮。暗反差〔正反差〕：将衍射光推迟1/4入，由于直射光和衍射光的干预作用，合成光的振幅是直射光与衍射光的差，而背景只有直射光，所以背检物体比背景暗。优点：可对未经染色的标本和活细胞进行显微内部结构的观察，提高分辨率

143.微分干预差显微镜〔differential-interferencemicroscopy〕利用的是偏振光，这些光经棱镜折射后分成两束，在不同时间经过样品的相邻部位，然后在经过另一棱镜将这两束光集合，从样品中厚度上的微小区别就会转化成明暗区别，增加了样品反差并且具有很强的立体感。一些较大的细胞器，如核、线粒体等，立体感特别强，适合于显微操作，影像具有浮雕感。

15丁达尔效应原理分辨力：0.004um 利用特殊聚光器，使照明光线不能进入物镜，经过标本的散射光进入物镜放大。 观察样品结构的明亮轮廓，如活细胞内的细胞核、线粒体等，但分辨不清内部结构。4.暗视野显微镜(darkfieldmicroscope)

16?(A)普通光学显微镜(B)相差显微镜(C)微分干预差显微镜(D)暗视野显微技术.

175.倒置显微