羊膜间充质干细胞源外泌体携OIP5-AS1靶向miR-29a-3p调控SIRT1促进糖尿病创面血管生.pdf

摘要

摘要

研究背景：

糖尿病创面是指糖尿病患者遭遇皮肤溃疡、创伤后发生的皮肤破损，是糖

尿患者常见并发症之一，易造成相应部位的功能改变和感觉异常。目前全球约

20%的糖尿病患者伴有糖尿病创面，且还在逐年增加。目前的治疗方法清创换药、

生物工程皮肤、负压创面治疗及皮瓣修复等都难以获得理想的效果。糖尿病创

面迁延不愈导致创面的进一步发展，给临床治疗带来了许多困难。既往研究认

为，糖尿病创面愈合延迟与高糖损害创面血管生成有关，因此促进创面血管新

生具有重要的临床意义。许多研究提示外泌体可携带活性分子诱导血管新生从

而加速糖尿病创面愈合。人羊膜间充质干细胞外泌体（humanAmniotic

MesenchymalStemCellExosomes，hAMSC-Exos）在糖尿病创面愈合过程中的作

hAMSC-Exos

用目前还不清楚。是否能促进血管新生以及促进血管新生的活性分

子尚不明确，其发挥疗效的分子机制也有待于进一步探索。

研究目的：

探讨羊膜间充质干细胞源外泌体携OIP5-AS1靶向miR-29a-3p调控SIRT1

促进糖尿病创面血管生成的作用与分子机制，为糖尿病创面的治疗提供新思路

和理论依据。

研究方法：

1.取健康产妇生产后废弃的羊膜组织，应用胰蛋白酶联合Ⅱ型胶原酶消化

法分离培养hAMSCs，采用流式细胞术和成骨、成脂分化鉴定hAMSCs；采用超

高速离心法提取hAMSC-Exos，通过透射电镜和westernblot对其进行鉴定。取

健康产妇生产后废弃的脐静脉组织，酶消化法分离培养人脐静脉内皮细胞

（HumanUmbilicalVeinEndothelialCells，HUVECs），采用免疫荧光染色技术

检测CD31的表达。观察HUVECs对PKH26标记的hAMSC-Exos摄取情况。

CCK-8、划痕、Transwell及管腔形成实验检测hAMSC-Exos对高糖处理后的

HUVECs增殖、迁移、成管的影响。制作糖尿病大鼠创面模型，观察hAMSC-Exos

对糖尿病创面血管生成的影响。

2.ArraystarlncRNAhAMSCshAMSC-Exos

采用人类芯片检测和之间差异

表达的lncRNAs和mRNAs；随后对差异表达mRNAs进行GO功能和KEGG通

II

摘要

路分析并采用RT-PCR检测芯片结果的可靠性；最后筛选hAMSC-Exos中与血

管生成相关的富集lncRNAs并构建ceRNA表达网。

3.RT-PCROIP5-AS1miR-29a-3pSIRT1

检测、、在糖尿病创面组织和高糖

处理后HUVECs中的表达情况并检测OIP5-AS1在HUVECs中亚细胞定位。

4.oe-OIP5-AS1si-OIP5-AS1miR-29a-3pmimicsmiR-29a-3pinhibitor

将、、、、

oe-SIRT1si-SIRT1HUVECsRT-PCR

和转染高糖处理后的，采用检测其转染效

率。RT-PCR或westernblot检测干扰或过表达干预后下游靶基因miR-29a-3p、

SIRT1mRNASIRT1

和蛋白的表达水平。

5.CCK8实验、划痕实验、transwell实验、成管实验检测oe-OIP5-AS1、

si-OIP5-AS1、miR-29a-3p