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安徽医科大学学报2018Aug;5(8)•1231*
网络出版时间：2018-6-2217:52网络出版地址：http://kns.cnki.net/kcms/detail/34.1065.R.1453.015.html
耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌药物敏感性和耐药基因研究
王健，潘亚萍，徐元宏，沈继录，王中新
摘要目的研究碳青霉烯类抗生素耐药的肺炎克雷伯菌目前全球性关注的热点问题[4-5]。产碳青霉烯酶是
(CRKP)抗生素敏感性和耐药基因分析，以及通过表型检测肠杆菌科细菌对碳青霉烯类药物耐药最主要的耐药
分析外排泵抑制剂对CRKP的亚胺培南、美罗培南和替加环机制，目前研究[6]肺炎克雷伯菌对亚胺培南耐药主
素耐药性影响。方法收集并筛选医院临床分离非重复的要系产生KP型碳青霉烯酶。该研究对临床分离
CRKP，采用纸片扩散法和Vik2法测定临床常见抗菌药物
的31株CRKP的耐药表型和耐药基因进行检测分
的敏感性;采用CaRa-NP试验和改良Hodge试验对碳青霉
析以及外排泵抑制剂对CRKP的作用进行探究。
烯酶进行筛选，并同对碳青霉烯酶耐药基因、ESBL和AmpC
酶基因进行PCR扩增和序列分析;采用琼脂稀释法检测筛1材料与方法
选菌株外排泵的表型;ERIC-PCR进行同源性分析。结果
共筛选出31株CRKPCaba，-NP试验和改良Hodge试验显示1.1材料
有1株细菌不产碳青霉烯酶;KPC酶基因的PCR检测结果1.1.1菌株来源31株CRKP来源于医院临床分
显示有27株KPC酶检测阳性，与碳青霉烯酶表型检测基本离菌，经法国梅里埃公司Vitek2全自动微生物鉴定
一致，部分菌株同时还产生了ESBL和AmpC酶;外排泵的抑系统鉴定，对碳青酶烯类均耐药。
制试验结果显示有3株对亚胺培南和美罗培南的最低抑菌1.1.2主要仪器和试剂GeneAmp970基因扩增仪
浓度（MIC)分别下降4倍和8倍，而替加环素却未下降;(美国PE公司）；C-880V〇2孵箱、蛋白电泳分析系
ERIC-PCR分型显示有9种类型，其中1型13株，为主要流统(美国Bio-Rad公司）；高速冷冻离心机（中国heal
行株。结论CRKP存在耐药基因积聚共存现象，导致
force公司）；抗菌药物（美国BBL公司、英国0X0ID
CRKP对大多数临床常用抗菌药物呈高度耐药;CRKP产碳
公司）；药敏试验培养基为Muller-Hinton琼脂;外排
青霉烯酶以KPC-2型酶为主，是CRKP对碳青霉烯类耐药的
栗抑制剂（Phe-AR-naphthylamide，PAN)(美国
主要机制;外排泵系统可能参与CRKP对碳青霉烯类耐药。
Sigma公司）；标志物DL2000、ExTaqDNA聚合酶试
关键词肺炎克雷伯菌;碳青霉烯酶;外排泵;耐药
中图分类号R446.5剂盒购自宝日医生物技术（北京）有限公司;琼脂糖、
文献标志码A文章编号1000-1492(2018)08-1231-05引物购自生工生物工程(上海)股份有限公司。
doi：10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2018.
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