以小耳残耳软骨细胞为种子细胞的组织工程软骨的实验研究的开题报告.docxVIP

以小耳残耳软骨细胞为种子细胞的组织工程软骨的实验研究的开题报告

一、研究背景和目的

软骨组织工程是一种治疗软骨缺损和关节疾病的新技术，通过种子细胞和支架材料的结合，生成生物活性的新软骨组织，可应用于修复损伤的关节、鼻部和耳部软骨。小耳残耳综合征（microtia-atresia）是一种完全性及部分性耳畸形，可影响听力和整体外貌。本研究旨在利用小耳残耳软骨细胞作为种子细胞，结合支架材料构建组织工程软骨，提高小耳残耳综合征的治疗效果。

二、研究内容和方法

1.实验内容：

（1）从小耳残耳综合征患者手术中获取软骨组织，分离出软骨细胞，进行细胞培养和扩增；

（2）制备支架材料，分别利用聚乳酸（PLA）和明胶（GEL）制备支架。

（3）将扩增后的小耳残耳软骨细胞种植于PLA和GEL支架内，构建二种不同组织工程软骨。

（4）采用细胞活性测试、RT-PCR、Westernblotting、组织切片及染色等方法对组织工程软骨的细胞增殖、产生胶原蛋白、糖原和软骨素等关键指标进行评估。

2.实验方法：

（1）细胞培养和扩增

收集小耳残耳综合征患者的软骨组织样品，利用酶消化法和细胞筛分法获得骨样本里的软骨细胞。将分离的小耳残耳软骨细胞种植在含10%胎牛血清（FBS）的DMEM/F12培养液中，37℃恒温培养箱内培养，并采用三倍体胰酶（TrypLE?Express）划分细胞。

（2）制备支架材料

聚乳酸（PLA）和明胶（GEL）是主要的支架材料，可以促进软骨工程与血管化的生长。将其分别加入伏安溶液中，搅拌至混合均匀，放于提前灭菌的加压流动堆积仪（pressure-controlledspinner）中进行固化。

（3）构建组织工程软骨

将软骨细胞种植于聚乳酸（PLA）和明胶（GEL）支架内，构建二种不同组织工程软骨。

（4）评估组织工程软骨

利用细胞活性测试方法（MTT法）、real-timePCR、Westernblotting、组织切片及染色方法等对组织工程软骨的细胞增殖、产生胶原蛋白、糖原和软骨素等关键指标进行评估。

三、研究意义

本实验通过利用小耳残耳软骨细胞作为种子细胞，结合聚乳酸（PLA）和明胶（GEL）制备的支架材料构建组织工程软骨，为小耳残耳综合征治疗提供了新的方案。该研究的成果不仅可推动近期新型软骨修复材料的研发，也可以为相关医学领域的发展提供有价值的参考建议。