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哺乳动物细胞冷冻保存

主要目的：

（1） 保存种子细胞，以便随时取用。这是保存细胞的最主要目的。

（2） 减少细胞被微生物污染的危险性。

（3） 减少细胞之间交叉污染的危险性。

（4） 减少细胞因传代培养而引起的遗传变异和形态改变。

（5） 避免有限细胞系出现衰老或恶性转化。

（6） 降低人力和物力。

冷冻保存要点：

（1）冷冻过程要缓慢。需要冷冻保存的细胞先在4°C冰箱中放置30-60分钟;然后转入-20°C,放置30分钟；然后再转入-80C放置16-18小时（或过夜）；最后放入液氮中长期保存。有条件的地方，可用程控降温仪，按每分钟-1到-3C速度降温，一直到-80C以下，然后直接放入液氮中长期保存。

（2） 冻存细胞必须处在对数生长期，活力大于90%，无微生物污染。

（3） 细胞浓度控制在：1x107—5x107/ml。

（4） 使用高浓度血清或蛋白保护剂。一般情况下，用于冷冻保存完全细胞生长培养液中血清浓度大于20%。

（5） 使用合适的细胞冷冻保护剂，以保护细胞在冷冻过程中免受冰晶破坏。目前，最常用的冷冻保护剂是DMSO（二甲基亚砜），使用终浓度为5—10%。但是，有些细胞系不能用DMSO作为冷冻保护剂，如人白血病细胞系HL-60。因为，DMSO能诱导HL-60细胞分化。在这种情况下，可选用其它冷冻保护剂，如甘油（glycele），羟乙基淀粉等。

特别注意