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附录 唾液酸测定法
(间苯二酚显色法)
本法系用酸水解方法将结合状态的唾液酸变成游离状态，游离状态的唾液酸与间苯二酚反应生成有色化合物，再用有机酸萃取后，测定唾液酸含量。
唾液酸对照品溶液（200μg/ml）的制备 精密称取唾液酸对照品10.52mg（1μg唾液酸相当于3.24nmol），置10ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，混匀，即为唾液酸贮备液（1mg/ml），按一次使用量分装，-70℃贮存，有效期1年。仅可冻融1次。4℃保存使用期为2周。精密量取唾液酸贮备液1ml，置5ml量瓶中，加水至刻度，即为每1ml含200μg的唾液酸对照品溶液，用前配制。
测定法取供试品适量，加水稀释至蛋白质浓度约为每1ml含0.2～0.4mg，作为供试品溶液。按下表取唾液酸对照品溶液、水及供试品溶液于10ml玻璃试管中，混匀，每管再加入间苯二酚-盐酸溶液（分别量取2%间苯二酚溶液2.5ml、0.1mol/L硫酸铜溶液62.5μl、25%盐酸溶液20ml，加水稀释至25ml，混匀。试验前4小时内配制）1ml，加盖，沸水煮沸30分钟(水浴面高于液面约2cm)，取出置冰浴中3分钟(同时振摇)后，每管加乙酸丁酯-丁醇液（取乙酸丁酯4份与丁醇1份混匀,室温下保存,12小时内使用）2ml，充分混匀，室温放置10分钟，照紫外-可见分光光度法（附录ⅡA），在波长580nm处测定吸光度。
唾液酸/μ
g
供试品
空白
2
4
5
6
8
唾液酸对照品溶液/μ
l
10
20
25
30
40
水/μl
100
90
80
75
70
60
供试品溶液/μl
100
用唾液酸对照品溶液的浓度对其相应的吸光度作直线回归（相关系数应不低于0.99），由直线回归方程求出5μg唾液酸的吸光度，再按下式计算
供试品唾液酸含量
(mol/mol蛋白质) ＝A×5×3.24×W×D
2
A×P×100
1
式中A为5μg唾液酸的吸光度；
1
A为供试品的吸光度；
2
D为供试品稀释倍数；
P为供试品蛋白质含量，μg/μl；W为1nmol促红素的量，相当于
1
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