药物分析与分离技术重点整理 .pdf

1、薄层色谱法对药物进行鉴别时，常用的方法有哪些?

（1）采用与同浓度的对照品溶液，在同一块薄层板上点样、展开、供试品溶液

所显主斑点的颜色与质量应与对照品溶液的主斑点一致，而且斑点的大小与颜色

的深浅也应大致相同。

（2）采用供试品溶液与对照品溶液等体积混合，应显示单一紧密的斑点。

（3）选用与供试品化学结构相似的药物对照品溶液与供试品溶液的主斑点比较，

两者值应不同。

（4）将（3）项下的两种溶液等体积混合，应显示两个清晰分离的斑点。

2、蛋白质的分离纯化方法：

（1）根据蛋白质溶解度不同的分离方法

1）蛋白质的盐析法：中性盐对蛋白质的溶解度有显著影响，一般在低盐浓度下

随着盐浓度升高，蛋白质的溶解度增加，此称盐溶；当盐浓度继续升高时，蛋白

质的溶解度不同程度下降并先后析出，这种现象称盐析。

2）等电点沉淀法：蛋白质在静电状态时颗粒之间的静电斥力最小，因而溶解度

也最小，各种蛋白质的等电点有差别，可利用调节溶液的pH达到某一蛋白质的

等电点使之沉淀，但此法很少单独使用，可与盐析法结合用。

3）低温有机溶剂沉淀法：用与水可混溶的有机溶剂，甲醇，乙醇或丙酮，可使

多数蛋白质溶解度降低并析出，此法分辨力比盐析高，但蛋白质较易变性，应在

低温下进行。

（2）根据蛋白质分子大小的差别的分离方法

1）透析与超滤：透析法是利用半透膜将分子大小不同的蛋白质分开。超滤法是

利用高压力或离心力，强使水和其他小的溶质分子通过半透膜，而蛋白质留在膜

上，可选择不同孔径的泸膜截留不同分子量的蛋白质。

2）凝胶过滤法：也称分子排阻层析或分子筛层析，这是根据分子大小分离蛋白

质混合物最有效的方法之一。柱中最常用的填充材料是葡萄糖凝胶（Sephadex

ged）和琼脂糖凝胶（agarosegel）。

（3）根据蛋白质带电性质进行分离

1）电泳法：各种蛋白质在同一pH条件下，因分子量和电荷数量不同而在电场

中的迁移率不同而得以分开。值得重视的是等电聚焦电泳，这是利用一种两性电

解质作为载体，电泳时两性电解质形成一个由正极到负极逐渐增加的pH梯度，

当带一定电荷的蛋白质在其中泳动时，到达各自等电点的pH位置就停止，此法

可用于分析和制备各种蛋白质。

2）离子交换层析法：离子交换剂有阳离子交换剂（如：羧甲基纤维素；CM-纤

维素）和阴离子交换剂（二乙氨基乙基纤维素），当被分离的蛋白质溶液流经离

子交换层析柱时，带有与离子交换剂相反电荷的蛋白质被吸附在离子交换剂上，

随后用改变pH或离子强度办法将吸附的蛋白质洗脱下来。

（4）根据配体特异性的分离方法－亲和色谱法

亲和层析法是分离蛋白质的一种极为有效的方法，它经常只需经过一步处理

即可使某种待提纯的蛋白质从很复杂的蛋白质混合物中分离出来，而且纯度很高。

这种方法是根据某些蛋白质与另一种称为配体(Ligand）的分子能特异而非共价地

结合。其基本原理：蛋白质在组织或细胞中是以复杂的混合物形式存在，每种类

型的细胞都含有上千种不同的蛋白质，因此蛋白质的分离，提纯和鉴定是生物化

学中的重要的一部分，至今还没的单独或一套现成的方法能移把任何一种蛋白质

从复杂的混合蛋白质中提取出来，因此往往采取几种方法联合使用。

3、体内药物分析常用的分析方法：

体内药物分析是借助于现代化的仪器与技术来分析药物在体内数量与质量的变

化，以获得药物在体内的各种药代动力学参数、代谢方式、代谢途径等信息。目

前，用于体内药物分析的方法有很多，归纳起来主要有以下几类:

（1）色谱分析法：体内药物分析中，色谱技术是研究体内药物及其代谢物最强

有力的手段，由于其具有分离和分析的双重功能，且有很高的选择性和较高的灵

敏度，因而可同时分析结构相似的药物和代谢物等。色谱法可分为薄层色谱法、

薄层扫描法、气相色谱法(GC)、高效液相色谱法(HPLC)及高效毛细管电泳法(HPCE)

等。

色谱法中以高效液相色谱法最为常用，特别是反相高效液相色谱法(RP-HPLC)更具

有试剂价廉、方法简单和适应范围广等优点现已成为体内药物分析方法中最重要

的方法，并常作为体内药物分析中评价其它方法的参比方法。GC法在体内药物

分析方法中也占有重要地位，虽然该法只限于高挥发性、热稳定性的化合物，但

通过化学衍生化技术可使应用范围大大增加。

（2）免疫分析法：是利用抗原、抗体的特异反应来测定体内药物的含量。它

将分析方法与免疫原理结合，进行超微量分析，具有灵敏度高、选择性强、操作

简便等优点。免疫分析法分为：放射免疫分析法、酶免疫分析法、化学发光免疫

分析、荧