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汇报人：AA2024-01-31蛋白质工程与细胞工程

蛋白质工程概述细胞工程基础知识蛋白质表达与纯化技术蛋白质改造与优化策略细胞工程在再生医学中应用细胞工程伦理法规与未来发展趋势目录

蛋白质工程概述01

蛋白质工程是通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行改造，或制造新的蛋白质，以满足人类生产和生活的需求。获取符合人类需要的、具有优良特性或功能的蛋白质，同时探索蛋白质的结构与功能关系，为生物技术和生物医药领域提供有力支持。蛋白质工程定义与目的蛋白质工程目的蛋白质工程定义

蛋白质结构与功能关系蛋白质一级结构与功能蛋白质的一级结构是指氨基酸的排列顺序，它决定了蛋白质的基本性质和功能。蛋白质高级结构与功能蛋白质的高级结构包括二级结构、三级结构和四级结构，这些结构层次对蛋白质的功能起着重要作用。结构域与功能关系蛋白质分子中的特定结构域通常与特定的功能相关联，通过改变结构域可以影响蛋白质的整体功能。

研究内容蛋白质工程的研究内容包括蛋白质的结构设计、功能预测、定点突变、基因合成、表达纯化以及活性测定等。研究方法蛋白质工程的研究方法主要包括理性设计和定向进化两种策略，其中理性设计是基于对蛋白质结构和功能的深入理解进行改造，而定向进化则是通过模拟自然进化过程来获取优良性状的蛋白质。蛋白质工程研究内容及方法

蛋白质工程在生物医药领域的应用包括药物设计、疫苗开发、抗体工程以及基因治疗等。生物医药领域在工业领域，蛋白质工程被广泛应用于酶制剂的生产、生物催化剂的开发以及生物燃料的制备等。工业领域在农业领域，蛋白质工程可以提高农作物的抗虫、抗病、抗逆等性能，同时改善农作物的品质和产量。农业领域在环保领域，蛋白质工程可以应用于废水处理、有毒有害物质的降解以及环境监测等方面。环保领域蛋白质工程应用领域

细胞工程基础知识02

控制物质进出细胞，维持细胞内环境稳定。细胞膜细胞质细胞核包含各种细胞器和细胞内液，是细胞代谢的主要场所。遗传信息库，控制细胞的生长和分裂。030201细胞结构与功能简介

直接从生物体内获取组织或细胞进行培养，用于研究生物体本身的生长和发育规律。原代细胞培养将原代细胞培养物中的细胞取出部分进行继续培养，可获得大量遗传性状均一的细胞，用于药物筛选、毒理学研究等。传代细胞培养通过单细胞培养获得遗传性状均一的细胞群，用于基因功能研究、疾病模型建立等。细胞克隆技术细胞培养技术分类及应用

染色体工程通过染色体操作改变细胞的遗传信息，包括染色体切割、重组、易位等。基因转导利用病毒或化学方法将外源基因导入靶细胞，使靶细胞获得新的遗传特性。基因编辑技术利用CRISPR-Cas9等基因编辑工具对细胞基因组进行精确修改，实现基因敲除、敲入、点突变等操作。细胞遗传操作技术原理

药物筛选疫苗制备基因治疗组织工程细胞工程在生物医药领域应用细胞培养技术进行药物敏感性试验和药效评价，加速新药研发进程。通过细胞培养技术大量繁殖病毒或细菌，制备疫苗用于预防传染病。利用细胞遗传操作技术将正常基因导入患者体内细胞，治疗遗传性疾病和某些恶性肿瘤。利用细胞培养技术和生物材料构建人工组织和器官，用于修复或替代受损组织和器官。

蛋白质表达与纯化技术03

123包括目标基因选择、引物设计、PCR扩增、DNA片段纯化、连接反应、转化和筛选等。基因克隆基本步骤根据目标蛋白特性和表达需求选择合适的表达载体，如质粒、噬菌体、病毒载体等。表达载体选择将目标基因插入表达载体中，构建成能在大肠杆菌、哺乳动物细胞等宿主细胞中表达的重组表达载体。表达载体构建基因克隆与表达载体构建方法

诱导表达条件优化通过优化IPTG浓度、诱导温度和时间等条件，提高目标蛋白在大肠杆菌中的表达量。融合蛋白和标签蛋白技术利用融合蛋白和标签蛋白技术，如GST、His-tag等，提高目标蛋白的可溶性和纯化效率。选择合适的大肠杆菌菌株根据目标蛋白特性和表达需求选择合适的大肠杆菌菌株，如BL21(DE3)、Rosetta等。重组蛋白在大肠杆菌中表达策略

03瞬时转染与稳定转染瞬时转染适用于快速筛选表达载体和条件，稳定转染适用于大规模生产。01哺乳动物细胞表达系统优点能进行复杂的蛋白质翻译后修饰，如糖基化、磷酸化等；表达的蛋白质更接近于天然蛋白质。02常用哺乳动物细胞系如HEK293、CHO、BHK等，具有高效表达外源基因的能力。哺乳动物细胞表达系统介绍

通过离心和超滤去除细胞碎片和大分子杂质。离心与超滤包括凝胶过滤层析、离子交换层析、亲和层析等，根据目标蛋白与杂质在物理或化学性质上的差异进行分离。层析技术如SDS等，根据蛋白质分子量和电荷差异进行分离和纯化。电泳技术如高效液相色谱（HPLC）等，具有高效、高分辨率和高灵敏度等特点，适用于复杂样品中蛋白质的分离和纯化。液相色谱技术蛋白质纯化方法比较与选择