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2024-01-24
分离工程实验课件微生物细胞的破碎及破碎率测定
目
录
CONTENCT
引言
微生物细胞破碎方法
破碎率测定方法
实验操作与结果分析
数据处理与误差分析
实验注意事项与改进方向
引言
01
02
03
掌握微生物细胞破碎的基本方法
学习并实践破碎率的测定方法
了解细胞破碎在生物工程下游技术中的应用
细胞破碎方法
破碎率测定
分离纯化
通过物理或化学手段破坏细胞壁和细胞膜，释放细胞内容物。
通过比较破碎前后细胞内特定成分的含量变化，计算破碎率。
破碎后，通过不同分离技术纯化目标产物，如离心、过滤、层析等。
01
02
03
01
02
03
3.破碎率测定
选择合适的测定方法（如显微镜观察、比色法、荧光法等）。
制备标准曲线，计算破碎率。
4.结果分析与讨论
讨论影响破碎率的因素及优化策略。
分析实验结果，比较不同破碎方法的效率。
微生物细胞破碎方法
利用高速旋转的搅拌器将微生物细胞悬浮液进行强烈的剪切和撞击，使细胞壁破裂。
将微生物细胞与研磨介质（如玻璃珠、石英砂等）一起放入研磨器中，通过研磨介质的摩擦和撞击作用破碎细胞。
将微生物细胞悬浮液通过高压匀浆器，在高压下使细胞受到强烈的剪切和撞击而破碎。
高速搅拌法
研磨法
高压匀浆法
酶解法
化学渗透法
超声破碎法
使用表面活性剂或有机溶剂等化学物质，改变微生物细胞壁的通透性，使细胞内容物渗出。
利用超声波的空化作用产生的瞬间高压和高温，使微生物细胞壁破裂。
利用特定的酶（如溶菌酶、纤维素酶等）作用于微生物细胞壁，使其分解并释放出细胞内容物。
机械破碎法通常具有较高的破碎效率，但可能会产生较多的碎片和杂质，对后续分离纯化步骤造成干扰。
非机械破碎法相对温和，能够减少对细胞内容物的破坏和污染，但可能需要较长的处理时间和较高的成本。
在实际应用中，需要根据微生物细胞的类型、实验目的和后续处理步骤等因素综合考虑选择合适的破碎方法。
破碎率测定方法
显微镜计数法
平板计数法
利用显微镜直接观察并计数破碎前后微生物细胞的数量，通过计算破碎细胞占总细胞数的比例来得到破碎率。
将破碎后的细胞悬液涂布在固体培养基上，培养后形成单菌落，通过计数菌落数来推算破碎前细胞的总数，进而计算破碎率。
直接计数法具有直观、准确的优点，但操作繁琐，耗时较长。显微镜计数法需要较高的操作技能和经验，而平板计数法则可能受到培养基、培养条件等因素的影响。
间接计数法操作简便、快速，但准确性相对较低。核酸和蛋白质测定法都需要依赖标准曲线，而标准曲线的制作和选择对结果影响较大。此外，不同种类的微生物细胞成分差异可能导致间接计数法的误差增大。
在实际应用中，可以根据实验需求和条件选择合适的测定方法。对于需要快速得到结果的实验，可以采用间接计数法；对于要求高精度和准确性的实验，则应选择直接计数法。同时，为了保证结果的可靠性，可以采用多种方法进行对比验证。
实验操作与结果分析
微生物细胞样品
破碎设备
离心机
显微镜
其他试剂和耗材
选择适当种类的微生物细胞，如细菌、酵母等。
如高压均质机、超声波破碎仪等。
用于分离破碎后的细胞碎片和细胞内容物。
用于观察细胞破碎前后的形态变化。
如PBS缓冲液、离心管、移液器等。
3.离心分离
2.细胞破碎
1.细胞样品的准备
4.观察与记录
5.数据处理与分析
将破碎后的细胞悬液进行离心分离，收集上清液和沉淀物。上清液中含有细胞内容物，而沉淀物则为细胞碎片。
将细胞悬浮液置于破碎设备中，按照设备操作指南进行破碎处理。注意控制破碎时间和强度，以避免过度破碎和产生过多热量。
将微生物细胞培养至对数生长期，收集细胞并用PBS缓冲液清洗。
使用显微镜观察细胞破碎前后的形态变化，并记录破碎率。破碎率可以通过计算破碎后细胞数量与原始细胞数量的比值得到。
对实验数据进行统计处理，计算平均值、标准差等，并绘制相应的图表进行结果展示。
1.破碎效果评估
通过观察细胞形态变化和测定破碎率，可以评估不同破碎方法和条件对微生物细胞的破碎效果。一般来说，破碎率越高，说明破碎效果越好。
2.细胞内容物释放分析
通过测定上清液中细胞内容物的含量，可以了解细胞破碎后内容物的释放情况。这有助于进一步分析细胞内代谢产物的变化以及目标产物的提取和纯化。
3.实验条件优化
根据实验结果，可以对实验条件进行优化，如调整破碎时间、强度、温度等参数，以提高细胞破碎效率和目标产物的得率。同时，也可以比较不同破碎设备的性能和使用效果，为实际应用提供参考依据。
数据处理与误差分析
将实验数据进行分类、归纳和整理，以便后续分析。
数据整理
利用图表、图像等方式将数据呈现出来，便于观察数据分布和规律。
数据可视化
运用统计学方法对实验数据进行处理和分析，如计算平均值、标准差、变异系数等。
数
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