微生物学实验104P.pptVIP

3.实验方法和步骤〔1〕玻璃器皿的准备培养皿的包装、移液管的包装、棉塞的制作、稀释水的配制〔2〕培养基的配制牛肉膏蛋白胨培养基的配方：牛肉膏0.3g，蛋白胨1g，NaCl0.5g，琼脂2.0g，水100ml，pH7.2-7.4。灭菌条件：121℃，15－20min。称量、加热溶解、调节pH、分装、加棉塞、斜面、灭菌思考题②了解加压蒸汽灭菌的原理和方法。①配制培养基的根本步骤有哪些?应注意什么问题?实验七微生物直接计数法〔血球计数板〕一、目的要求二、根本原理：此法是利用血球计数板在显微镜下直接进行测定。它观察在一定的容积中的微生物的个体数目，然后推算出含菌数，包括死活细胞均被计算在内，还有微小杂物也被计算在内。这样得出结果往往偏高。这种方法常用于形态个体较大的菌体或孢子。计数板是一块特制的厚玻璃片，玻片上有四个槽构成三个平台，中央平台又由一短槽隔成两半，其上各刻有一小方格网，每个方格网共分九个大格，中央的一大格作为计数用，称为计数室。计数室刻度有2种：一种是25中格X16小格，而另一种为16中格X25小格，它们都是由400个小格组成。每个大方格边长为1mm，那么每个大方格面积为1X1=1mm2。盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间高度为0.1mm,所以每个计数室的体积为0.1X1X1=0.1mm3,每个大格有400个小格，所以每个小方格体积为0.1/400=1/4000mm3=1/4000,000ml。****#####三、材料与仪器：1、待测样品：酵母菌悬液2、显微镜，血球计数板，接种环,盖玻片等。四、方法与步骤:1、取洁净的血球计数板，在计数室上面盖上盖玻片。2、取稀释到一定程度〔5~10个酵母/小格〕酵母液，从盖片边缘滴一小滴，使菌液自行渗入，计数室内不能有气泡。先在低倍镜下找到小方格网后，再转换高倍镜观察并计数。3、如用16X25计数板，只计四个角上中方格的菌数。假设是25X16的计数板，除计数四个角上的中格菌数外，还要计算中央中格的菌数。每个样品重复计数2~3次。计数时应不时调节焦距，才能观察到不同深度的菌体。4、位于格线上的酵母菌一般只计此格的上方线及左方线上的菌体。5、计数方法：样品中菌数/ml=每小格平均菌数x4000,000x稀释倍数，本实验采用25x16规格，要求数这些方格中的全部小格即80个小格。设：每个中方格的菌数为A，那么每小格平均菌数=〔A1+A2+A3+A4+A5)/80A1+A2+A3+A4+A5样品中的菌数/ml=X4000,000X稀释倍数80结果记录：微生物名称总菌数个/ml第一个中格第二个中格第三个中格第四个中格第五个中格第一次测定第二次测定平均四、测定本卷须知:1、测定时，酵母菌液要摇匀，防止酵母凝聚沉淀。2、活酵母有芽殖现象，假设芽体到达母细胞大小的一半时，即可作为两个菌体计数，假设芽体小于母细胞一半时为1个酵母细胞。3、位于格线上的酵母菌一般只计此格的上方线及左方线上的菌体。五、思考题：1、用血球计数板计数时，哪些步骤易造成误差？2、血球计数板测定原理是什么？它有哪些优点？实验八、化学药物对微生物的作用一、实验目的：了解抗生素对微生物的杀灭作用。二、实验原理：抗生素等化学药物对微生物具有抑制或杀灭作用。因此在实际生活中常用化学药物进行杀菌。不同种类的化学物质对微生物的杀菌能力不一样，作用条件也有差异，其效果也不同，在使用时需要灵活选择。三、实验器材：1.活材料：大肠杆菌、枯草杆菌斜面菌种。2.培养基及试剂：牛肉膏蛋白胨培养基、HgCl2、庆大霉素和青霉素。关键点：严格掌握乙醇脱色程度，如脱色过度，那么阳性菌被误染为阴性菌；而脱色不够时，阴性菌被误染为阳性菌。菌龄也影响染色结果，如阳性菌培养时间很长，或已死亡及局部自行溶解了，都常呈阴性反响。五、实验内容1.对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌分别进行革兰氏染色。2.对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌混合涂片进行革兰氏染色。大肠杆菌〔G-〕枯草芽孢杆菌〔G+〕金黄色葡萄球菌与大肠杆菌六、实验思考题1.绘出大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌的形态图，注明放大倍数及颜色。2.为什么革