枯草芽孢杆菌产碱性蛋白酶液体发酵培养基优化及条件的研究.pdfVIP

枯草芽孢杆菌产碱性蛋白酶液体发酵培育基优化及条件的争论

摘要通过单因素试验在摇瓶条件下对枯草芽胞杆菌产碱性蛋白酶的液体培育基

进展优化，确定了最正确碳源为糊精。进一步在5L的发酵罐上进展发酵并对发

酵过程进展掌握得到以下结论：枯草芽孢杆菌产碱性蛋白酶为生长相关型发酵

类型，生长周期为38h，发酵到36h时酶活到达最大，酶活最大值为433U/mL

，此时pH为8.35，OD600为1.158。可以用pH是否超过8来当作发酵终点的

表观特征。

关键词枯草芽孢杆菌液体发酵培育基优化发酵条件

引言碱性蛋白酶(Alkalineprotease)广泛存在于微生物中,最早觉察在猪的胰脏

中[1]，1913年Rhom首先将胰蛋白酶作为洗涤浸泡剂使用。1945年瑞士的

Dr.Jagg等觉察了微生物碱性蛋白酶，使其成为洗涤剂的主要添加剂之一。碱性

蛋白酶在丝绸、制革工业、饲料工业、动物食品加工中也有广泛用途，如添加到

动物饲料中以提高饲料利用率；用于制作海鲜调味品；用于CGM(玉米渣)的水

解，以制取玉米肽饮料；水解大豆蛋白生产大豆多肽等。由于市场的需求，高产、高

效、耐高温、耐高碱的四高型碱性蛋白酶成为国内外当前争论的热点。枯草芽孢

杆菌是生产碱性蛋白酶的传统菌株，具有产蛋白酶量大，耐高温、高碱等特点，因

此对枯草芽孢杆菌碱性蛋白酶的争论成为蛋白酶争论的热点[5]。我国争论和生

产的碱性蛋白酶的活力水平虽然不断提高，但大多数承受进口的碱性蛋白酶制剂

，并且大规模工业生产中用的碱性蛋白酶还是主要依靠进口[6]。本试验通过对

枯草芽孢杆菌发酵培育基进展优化，并对发酵过程进展争论，以期进一步提高枯

草芽孢杆菌产粗酶的活力及确定其最正确产粗酶的时间段。

1材料与设备仪器

1.1菌株

枯草芽孢杆菌(由试验室供给)

1.2材料与试剂

福林试剂、三氯乙酸〔0.4mol/L〕、碳酸钠溶液〔0.4mol/L〕、干酪素溶液(10g/L)

氢氧化钠溶液〔0.5mol/L〕、蔗糖、乳糖、葡萄糖、糊精、可溶性淀粉、柠檬酸

钠、磷酸氢二钾、无水氯化钙。

1.3仪器与设备

恒温水浴锅、分光光度计、5升发酵罐、离心机、试管、吸管、滤纸、酸度

计、高压灭菌锅、超净工作台、恒温摇床

1.4培育基

根本培育基：胰蛋白胨5g/L、柠檬酸钠3g/L、磷酸氢二钾10g/L、氯化钙

3g/L

种子培育基：胰蛋白胨5g/L、酵母粉5g/L、葡萄糖10g/L、磷酸氢二钾18

g/L

发酵培育基：酵母粉2g/L、胰蛋白胨3g/L、糊精50g/L、柠檬酸钠3g/L、

磷酸氢二钾10g/L、氯化钙3g/L

配培育基时水用自来水。

2方法

2.1酶活测定

2.1.1标准曲线制备

表1不同酪氨酸浓度下的吸光值A

680

管酪氨酸酪氨水/ml0.4mol/L吸光

号浓度〔ug/L〕酸使用/mlNa2CO3值/A

680

000.01.050

1100.10.950.111

2200.20.851.2065

3300.30.750.324

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