DB35T 1761-2018蜜蜂黑蜂王台病诊断技术.docx

ICS65.140

B47

DB35

福建省地方标准

DB35/T1761—2018

蜜蜂黑蜂王台病诊断技术

DiagnostictechniquesforBlackQueenCellDiseaseofHoneyBees

2018-04-03发布 2018-07-03实施

福建省质量技术监督局发布

DB35/T1761—2018

目次

TOC\o1-5\h\z前言 II

范围 1

规范性引用文件 1

术语和定义 1

缩略语 1

5疾病概述 2

6临床诊断 2

实验室诊断 2

综合判定 5

附录A（规范性附录） 溶液的配制 7

附录B（资料性附录） 溶液的配制 8

附录C（资料性附录） 核酸扩增电泳图 9

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本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

本标准由福建出入境检验检疫局提出并归口。

本标准起草单位：福建出入境检验检疫局检验检疫技术中心、福建农林大学、吉林出入境检验检疫局、厦门瑞德利校准检测技术有限公司。

本标准主要起草人：张体银、郑腾、王武军、黄少康、宋战旳、张永东、张志灯、白泉阳、林杰、于师宇。

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蜜蜂黑蜂王台病诊断技术

1范围

本标准规定了蜜蜂黑蜂王台病临床诊断、实验室诊断和综合判定。本标准适用于蜜蜂黑蜂王台病的诊断和蜜蜂黑蜂王台病毒的检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB/T6682-2008分析实验室用水规格和试验方法

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

王台queenceII候选蜂王的寝宫，即工蜂为培育蜂王所筑成的巢房。

注：王台亦名“母蜂房”

3.2

黑蜂王台病blackqueenceIIdisease

由蜜蜂黑蜂王台病毒(Blackqueencellvirus)引起的蜂王幼虫及蛹感染，并可导致巢房变黑，进而引发蜜蜂大量死亡的一种严重的蜜蜂病毒病。

4缩略语

下列缩略语适用于本文件。

BQCV：黑蜂王台病毒(Blackqueencellvirus)

Ct：循环阈值(Cyclethreshold)

DEPC：焦碳酸二乙酯(Diethypyrocarbonate)

dNTP：三磷酸脱氧核昔酸(Deoxynucleosidetriphosphate)

EB：漠化乙锭(Ethidiumbromide)

RNA：核糖核酸(Ribonucleicacid)

RT-PCR：逆转录聚合酶链式反应(Reversetranscriptionpolymerasechainreaction)

TBE：三羟甲基氨基甲烷-硼酸-乙二胺四乙酸(Trihydroxymethylaminomethane~boricacidethylenediaminetetraaceticacid)

5疾病概述

蜜蜂黑蜂王台病（Blackqueencelldisease）是由黑蜂王台病毒（Blackqueencellvirus,BQCV）引起的一种常见的蜜蜂病毒病，春季和初夏高发，主要危害蜂王的幼虫和蛹，并可导致巢房变黑，进而引发蜜蜂大量死亡，目前已呈全球性分布。

6临床诊断

6.1临床症状

1.1患病蜂王幼虫体色变黄，表皮逐渐硬化呈囊状。

6.1.2患病蜂蛹体色变暗，快速死亡。

1.3患病蜂王体色先变为灰白色，逐渐再变为黑色，最后王台内壁变成棕色或黑色。

1.4成年蜜蜂主要有尾部变黑，体毛脱落、斑纹混乱、蜜蜂吻拉长，严重时无法飞行而只能爬行移动。

6.2初步诊断

当蜂群出现以上部分或全部临床症状时，可做出初步诊断，确认需要进行实验室诊断。

7实验室诊断

1设备、材料和试剂

1.1设备

1.1.1普通PCR扩增仪。

1.1.2荧光PCR仪。

7.1.1.3台式冷冻高速髙心机。

7.1.1.4 微量移液器击口卜iL?10卩L, 2此?20叱，20叱?200卩L, 100卩L?1000卩L）。

7.1.1.5水平电泳仪。

7.1.1.6凝胶成像系统。

7.1.1.7电子天平（感量0.01g）。

7.1.1.8冰箱（2°C?8°C