液相色谱-核磁共振联用技术在药物分析及体内药物分析中的应用.pdfVIP

液相色谱－核磁共振联用技术在药物分析

及体内药物分析中的应用

摘要：本文具体的介绍了液相色谱——核磁共振联用的原理和操作技术，列举

该技术在药物分析及体内药物分析之中的应用；争论了目前液相色谱——核磁共

振在实际工作中存在的主要问题及其适用条件。

关键词高效液相色谱，核磁共振，药物分析，体内药物分析

：

前言

液相色谱-核磁共振(LC-NMR)联用技术并不是一个概念。早在70年月末就有

LC-NMR联用技术的报道。将高分别力量的高效液相色谱(HPLC)与供给最丰富

构造信息的NMR结合似乎是很自然的事,实际上由于这两种技术存在着固有的

冲突:NMR的检测灵敏度明显比HPLC低,且作为HPLC流淌相的混合溶剂往往

产生多重强溶剂峰而影响溶质峰的正确检测,因此HPLC和NMR的联用并不是

两种技术的简洁组合。长期以来人们一般先用HPLC对混合物进展分别,然后

将分别好的组分移至NMR试管中，再进展NMR检测,最终确定混合物中该组分

的构造,整个过程要消耗很多时间。近年来随着NMR理论和技术的进展,消灭

很多技术方法。高性能脉冲梯度场技术和选择激发技术的消灭,使得多重溶剂

峰的有效抑制成为可能。高场探头性能的不断改进,大大提高NMR的检测灵

敏度。NMR谱仪的模块化设计和硬件的快速掌握,使得接口设计更为敏捷。这些

技术解决HPLC和NMR的匹配问题。由于HPLC-NMR一体化联用技术能一

次性完成从样品的分别纯化到峰的检测、构造测定和定量分析,供给大量分子

构造和混合物组成的信息,提高了争论效率和敏捷性,因此引起人们的广泛关

注,并获得快速进展。本文主要阐述液相色谱-核磁共振的原理、操作技术,争

论液相色谱-核磁共振在实际工作中存在的主要问题及其适用条件。并列举

该技术的药物分析及体内药物分析之中的应用。

1.液相色谱-核磁共振的原理

样品注入高效液相色谱系统内，在高压泵的推动下，各组分得以分别，并依次经

过常规的紫外(UV或DAD)检测器，此后柱流出液可通过聚四氟乙烯导管直接或

间接流入超导核磁共振仪内部，就实现LC-NMR的联用。LC-NMR联用技术

需要解决LC和NMR的接口、流体匣(flowcell)的设计、溶剂峰压制、液相和核

磁溶剂的选择和NMR灵敏度等问题[2]

1.1LC-NMR的流体匣和探头

LC-NMR内部的核心探测系统是一个U形的流体匣，这是特地为LC-NMR设

计的探头(probe)装置[2]。流出紫外检测器的组分通过聚四氟乙烯的毛细导管直

接流入流体匣内,流体匣中有一鼓起的局部，为流体匣的测量部位，其直径为2

～4mm，体积为60～250μL。检测线圈(detectioncoil)则直接围绕在该测量

部位的外围，这样可以得到最正确的填充系数(filingfactor,Φ=Vs/Vc

,Vs和Vc分别代表样品和NMR线圈的体积)，使样品与线圈之间作用最严密，

大大提高了灵敏度。流体匣出口通常接入废液瓶或者样品收集器。

1.2NMR的灵敏度

众所周知，NMR的灵敏度是比较低的，这也是制约HPLC—NMR进展的问题。NMR

的信噪比与样品浓度、磁场强度、检测线圈的填充因子、弛豫时间、扫描次数等

有关。高场强〔700M、800M甚至900M〕NMR的运用，以及软件滤波、消噪技术的

进展，都极大地提高NMR的灵敏度。此外还可承受超低温的探头和前置放大器，

由于低温冷却电子元件可削减电子元件的噪音，因此可使NMR的灵敏度提高三至四

倍[3、4]。随着技术的进步，利用HPLC—NMR进展简单微量自然产物的争论将变得

更加简洁。

1.3溶剂的选择和溶剂峰压制

由于HPLC的流淌相中含有大量的H，它将产生比被分别的化合物强的多的NMR

信号。因此要从中检测到微量的样品信号，必需承受适当的脉冲序列来抑制溶剂的

信号。目前最常承受的抑制溶剂峰的脉冲序列是在混和时间和弛豫延迟期内对溶剂

的共振信号进展选择性照耀的常规一维NOESY序列，用于一维谱测试；此外还

有基于脉冲场梯度的WET(watersuppressionenhancedthroughT1effects)序

列，可用于一维和二维谱测试。此外，使用氘代