高糖诱导HT-22小鼠海马神经元代谢记忆细胞模型的构建及影响.pdfVIP

高糖诱导HT-22小鼠海马神经元代谢记忆

细胞模型的构建及影响

摘要：目的体外构建高糖诱导HT-22小鼠海马神经元“代谢记忆”细胞模型，探究“代谢记忆”对HT-22细胞凋

亡和组蛋白乙酰化的影响。方法以高糖培养基（葡萄糖浓度为55mmol/L）和常规糖培养基（葡萄糖浓度为

25mmol/L）培养HT-22细胞，分为常糖组（NG4、6、8组，25mmol/L葡萄糖分别培养4、6、8d），高糖组（HG4、6、8组，

高糖培养4、6、8d），代谢记忆组（HG2NG2、HG2NG4、HG2NG6、HG4NG2、HG4NG4组，即高糖2d转25mmol/L葡萄糖

培养2、4或6d，高糖4d转25mmol/L葡萄糖培养2d或4d）。CCK-8法检测细胞活力变化，检测细胞培养上清液中

乳酸脱氢酶（LDH）释放量，筛选出建立“代谢记忆”模型的最佳作用时间。后续将细胞分为NG4组、NG8组、HG4组、

HG4NG4组和HG8组，光学显微镜观察各组细胞形态；流式细胞术检测各组细胞凋亡率；酶联免疫吸附试验（ELISA）

检测去乙酰化酶（HDAC）和组蛋白乙酰转移酶（HAT）活性；Westernblot检测组蛋白去乙酰化酶4（HDAC4）、B淋巴细

胞瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）和胱天蛋白酶3（Caspase-3）蛋白表达情况。结果HG4NG4组为理想的高

糖“代谢记忆”细胞模型；NG4、NG8组细胞交织成致密网状，生长状态良好，细胞呈梭形，突触结构明显。而HG4、8组

细胞胞体变圆，突触结构消失，生长受抑，HG4NG4组细胞数量增多但形态受损；流式细胞术结果显示，与NG8组相

比，HG8、HG4NG4组凋亡率增加（P＜0.05）；ELISA结果表明，与NG8组相比，HG8组及HG4NG4组HAT和HDAC的

水平均增高（P＜0.05），与HG8组相比，HG4NG4组HAT和HDAC差异无统计学意义；Westernblot结果显示，与NG8

组相比，HG8组、HG4NG4组HDAC4、Bax和Caspase-3蛋白表达增加，Bcl-2蛋白表达水平降低（P＜0.05），与HG8组

相比，HG4NG4组蛋白表达差异无统计学意义。结论HT-22小鼠海马神经元细胞经高糖55mmol/L培养4d后，

再以25mmol/L葡萄糖培养4d是理想的高糖“代谢记忆”细胞模型。其机制可能与高糖模型中HDAC、HAT活性及

HDAC4表达升高有关。

关键词：糖尿病；脑疾病；细胞凋亡；组蛋白乙酰转移酶；组蛋白脱乙酰基酶类；HT-22；代谢记忆

Abstract:ObjectiveToconstructaninvitrometabolicmemorycellmodelofHT-22mousehippocampalneurons

inducedbyhighglucose,andtoinvestigatetheeffectofmetabolicmemoryonapoptosisandhistoneacetylationinHT-22

cells.MethodsHT-22cellswereculturedinhighglucosemedium(glucoseconcentrationwas55mmol/L)and

conventionalglucosemedium(glucoseconcentrationwas25mmol/L),andcellsweredividedintothecontrolgroup(NG4,6

and8groups,25mmol/Lglucosewasculturedfor4,6and8days,respectively),thehighglucosegroup(HG4,6and8

groups,respectively)andthemetabolicmemorygroup(HG2NG2,HG2NG4,HG2NG6,HG4NG2andHG4NG4groups,high

glucoseculturefor2daysto25mmol/Lglucoseculturefor2,4or6days,highglucoseculturefor4daysto25mmol/L

glucoseculturefor2or4days).CellviabilitywasdetectedbyCCK-8method.Thereleaseoflactatedehydrogenase(LDH)in

cellcul