基于同位素稀释液相色谱串联质谱技术检测血清25(OH)D3的候选参考测量程序的建立及性能评价.pdfVIP

基于同位素稀释液相色谱串联质谱技术检测血清25（OH）

D3的候选参考测量程序的建立及性能评价

摘要：目的建立基于同位素稀释液相色谱串联质谱技术（liquidphasechromatographytandemmassspectrometry，

LC-MS/MS）的血清25羟维生素D3[25-hydroxyvitaminD3，25(OH)D3]的候选参考测量程序。方法采用同位素标

准溶液为内标，液液萃取进行前处理，正离子电喷雾模式进行监测。参照美国临床实验室标准化协会（Clinicaland

LaboratoryStandardsInstitute，CLSI）C62-A和EP15-A3等文件，对方法的正确度、精密度、线性范围、定量限、检测

下限、相对基质效应等进行验证。采用候选参考测量程序和质谱常规程序检测40份临床血清样本，评价两种方法的一

致性。结果候选方法的分析时间为15min，通过色谱的等度洗脱可有效分离同分异构体3-epi-25（OH）D3，特异度好。

测定参考实验室室间比对（RELA）样本，偏倚低于1.5%。批内精密度和批间精密度分别为0.75%~2.31%和1.28%~2.01%。

定量限和检测下限分别为0.85ng/ml和1.84ng/ml。在2.5~220ng/ml浓度范围内线性良好。无相对基质效应和携带污染。

r

质谱常规程序与候选参考程序的相关性较好（=0.982）,但低浓度样本处的偏差超出卫健委临检中心室间质评的允许总

误差±25%。结论成功建立了基于LC-MS/MS技术的血清25（OH）D3的候选参考测量程序，分析性能符合要求，

可用于临床常规方法的量值溯源。

关键词：25羟维生素D3；候选参考测量程序；性能评价

EstablishmentandPerformanceEvaluationofCandidateReference

MeasurementProceduresfortheDetectionofSerum25(OH)D3Basedon

IsotopeDilutionLiquidChromatographyTandemMassSpectrometry

Abstract:ObjectiveToestablishacandidatereferencemeasurementprocedureforthedetectionofserum25-hydroxyvitamin

D3[25(OH)D3]basedonisotopedilutionliquidchromatographytandemmassspectrometry(LC-MS/MS).MethodsIsotope

standardsolutionwasusedasinternalstandard,liquid-liquidextractionwasusedforpre-treatment,andpositiveionelectrospray

ionizationmodewasusedformonitoring.Theaccuracy,precision,linearrange,limitofquantitation,detectionlimitandrelative

matrixeffectofmethodwereverifiedbasedondocumentsoftheAmericaClinicalandLaboratoryStandardsInstitute(CLSI)

suchasC62-AandEP15-A3.Candidatereferencemeasurementprocedureandmassspectrometryroutineprocedurewereused

todetect40clinicalserumsamples,andtoevaluatetheconsistencyofthetwomethods.ResultsTheanalysistimeofthe

candidatemethodwas15min.Isometricelutionof