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自动核酸合成仪性能测试技术规范

1范围

本规范适用于基于固相亚磷酰胺法合成寡核苷酸的自动核酸合成仪性能测

试。

2引用文件

本规范引用了下列文件：

GB/T6682-2008分析实验室用水规格和试验方法

GB/T34797-2017核酸引物探针质量技术要求

凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本规范；凡是不注日期的引

用文件，其最新版本适用于本规范。

3概述

自动核酸合成仪是基于固相亚磷酰胺法原理的DNA或RNA类寡核苷酸的自动化合成仪器，是一套由计算机控制的试剂递送系统。按照计算机控制程序，A、T、C、G不同碱基经过解封、活化、偶联、戴帽、氧化步骤后被依次添加到固体支持物上（通常是可控孔径玻璃），最终寡核苷酸从固相载体上切下，并去除保护基，人工合成得到目标寡核苷酸。寡核苷酸合成过程中合成腔和管道的压

力控制、试剂的进样量、气密性等量化指标对最终寡核苷酸合成质量有关键影响。

4计量特性

合成仪的计量特性及计量特性指标见表1。

表1自动核酸合成仪计量特性

计量特性

指标

压力示值误差

最大允许误差≤5%

进样量示值误差

最大允许误差≤2%

进样量重复性

≤2%

气密性测试

≤0.5kPa/min

合成核酸相对分子质量相对误差

≤0.05%

注：以上技术指标不适用于合格判别，仅供参考。

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5校准条件

5.1环境条件

5.1.1温度：（15~30）℃;

5.1.2相对湿度：80%；

5.1.3供电电源：电压（220土22）V，频率（50土1）Hz；

5.1.4附近无影响仪器正常工作的电磁场及机械振动；

5.1.5仪器接地良好。

5.2校准用试剂及设备

5.2.1压力标准器：压力标准器最大允许误差绝对值应不大于被检压力仪表最大允许误差绝对值的1/4；

5.2.2乙腈：AR级别；

5.2.3分析天平：天平准确度为○I级，分度值不大于0.1mg；

5.2.4液质联用飞行时间质谱仪（TOF）；

5.2.5其他仪器和辅助设备：压力泵，用于辅助不带加压功能的压力标准器。

6校准项目和校准方法

6.1压力示值误差

用胶管、压力标准器和待测压力仪表相连，若压力标准器不含加压功能，需要配备压力泵等压力发生器。在待测压力仪表规定的测量范围内（或工作压力点附近），均匀选取不少于3个示值误差测量点。测量时，由零点均匀缓慢加压至

所选的最小测量点，记录读数，如此依次测量直至最大测量点，再依次逐点降压

测量直至零位。

按公式（1）计算压力表的示值误差。

（1）Δp=p_

（1）

式中:Δp———压力示值误差，kPa；

p———待测压力表示值，kPa；

ps———压力标准器示值，kPa。

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将仪器各部分连接好，以乙腈的进样管道为例，设定进样量为200μL(或其他仪器常用进样量作为校准点)

将仪器各部分连接好，以乙腈的进样管道为例，设定进样量为200μL(或其他仪器常用进样量作为校准点)，启动仪器，在进样管道出口用事先称重过的洁净离心管收集乙腈，收集完成之后，在分析天平上称重，根据实验时乙腈的密度，将所进样乙腈的质量换算成体积，该测定重复3次。按公式（2）计算进样量实

测值V，按公式（3）计算进样量的示值误差ΔV。

V=(W2-W1)/pt（2）

式中：

V——进样量实测值，μL；

W2——离心管+液体的质量，g；

W1——离心管的质量，g；

pt——实验温度下乙腈的密度，g/cm3，不同温度下乙腈的密

度参见附录A。

ΔV=Vs-V（3）

式中：

V——同一设定进样量3次测量值的算术平均值，μL；

Vs——进样量设定值，μL。

6.3进样量重复性

按6.2中的测量方法重复进样和检测6次，按照公式（4）计算进样量的重

6.2进样量示值误差

复性。

RSD=

式中：

RSD——相对标准偏差，%;

Vi——第i次体积的测量值，μL;

(Vi-V)2

n-1

根根100%

（4）

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V——n次体积测量的平均值，μL;

n——检测次数。

6.4气密性测试（本节仅适用