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荧光酶标分析仪校准规范

1范围

本规范适用于各类板式荧光酶标分析仪、多功能酶标分析仪中荧光分析模块（不包

含时间分辨荧光分析模块）的校准。

2引用文件

本规范引用了下列文件：

JJG537-2006荧光分光光度计

GB/T32267-2015分析仪器性能测定术语

注：凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本规范；凡是不注日期的引用文件，其最

新版本（包括所有的修改单）适用于本规范。

3概述

荧光酶标分析仪是利用酶标记抗体等方式，进行免疫分析后，将没有荧光活性的底物经过酶催化转化成具有荧光活性的标记物，在合适波长的激发光作用下发出荧光，其荧光强度与被分析物的含量相关，通过检测荧光强度分析待测物的仪器。荧光酶标分析仪一般由微孔板支架、温控装置、分光装置、光子检测装置、电源部分、计算机及软件组成。仪器采用光电倍增管（PMT）检测单光子信号，传输至放大器并经过模数转换后

传输给计算机，通过计算得出检测结果。

4计量特性

荧光酶标分析仪各项计量性能指标见表1。

表1荧光酶标分析仪的主要计量特性指标

计量特性

计量特性指标

激发波长示值误差

±5nm

发射波长示值误差

±5nm

重复性

≤8%

1

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2

续表

线性

r≥0.99

检出限

以6.5的测量结果表示

注：

1激发光波长和发射光波长示值误差的计量特性指标也可参照厂商给出的技术要求。

2r为线性相关系数。

3以上技术指标不用于合格判别，仅供参考。

5校准条件

5.1环境条件：

5.1.1环境温度：（10～30）℃。

5.1.2相对湿度：≤85%。

注：若制造商为设备规定了工作温、湿度范围，则应在制造商规定的温湿度范围内试验。

5.2校准用的标准物质及其他设备

5.2.1荧光标准溶液

根据仪器的荧光通道类型，选择具有合适发射和激发波长的荧光物质（硫酸奎宁、

荧光素、罗丹明等），配制为合适浓度的荧光标准溶液。

5.2.2荧光酶标分析仪计量校准板

测量范围为1%~100%，扩展不确定度不大于5%（k=2）；输出光谱峰值波长范围为（200~800）nm，也可根据仪器的波长范围选择其他合适波长范围的计量校准板，最大

允许误差±1nm。

5.2.3光纤光谱仪

测量范围（200~800）nm，最大允许误差为±1nm。

5.2.4标准汞灯

测量范围（250~900）nm，最大允许误差为±1nm。

5.2.5板式光谱仪

波长测量范围（400~800）nm，最大允许误差±1nm。

5.2.6板式荧光模拟器

输出光谱峰值波长范围（450~650）nm，最大允许误差±1nm；输出光亮度可调节，

10%~100%亮度范围内线性度不低于0.999。

注：可根据实际情况配备荧光酶标分析仪计量校准板、光纤光谱仪、标准汞灯、板式光谱仪、

板式荧光模拟器中的一种或多种标准器。

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6校准项目和校准方法

6.1激发波长示值误差

对于滤光片式的荧光酶标分析仪，将滤光片从仪器激发光路侧卸下，放置在光纤光谱仪的光路中，选择透射比扫描模式，从低于滤光片标称波长20nm处开始扫描，至高于滤光片标称波长20nm处为止，通过软件读出峰值波长wex，i，重复三次取其平均值，

根据式（1）计算激发波长示值误差。

对于光栅式分光的荧光酶标分析仪，选择合适的光纤及接头，连接激发光路与光纤光谱仪，或将光纤接在开孔的酶标板上，从酶标分析仪控制软件上设置所需校准的激发波长，在光纤光谱仪上选择光谱扫描模式，从低于设定激发波长20nm处开始扫描，至高于设定激发波长20nm处为止，通过软件读出峰值波长wex，i，重复三次取其平均值，

根据式（1）计算激发波长示值误差。

也可以使用板式光谱测量仪进行测量。将板式光谱仪置于微孔板架上，从酶标分析仪控制软件上设置所需校准的激发波长，从低于设定激发波长20nm处开始扫描，至高于设定激发波长20nm处为止，通过板式光谱仪的软件读出峰值波长wex,i，重复三次取

其平均值，根据式（1）计算激发波长示值误差。

(1)?wex=wex?wex,i

(1)

式中：

Δwex——激发波长示值误差，nm；

wex——激发波长滤光片标称值或激发波长设定值，nm；

ex,iw——激发波长滤光片峰值波长测量值或激发光谱峰值波长测量值，

ex,i

6.2发射波长示值误差

对于滤光片式的荧光酶标分析仪，将滤光片从仪器发射光路侧卸下，放置在光纤光谱