- 1、本文档共63页,可阅读全部内容。
- 2、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
中文摘要
转录因子PBX1抗UVB诱导的黑色素细胞黑色素生成及其机制初探
背景:
黑色素细胞主要存在于毛囊、表皮和眼睛中,主要负责生成黑色素,这是头发
以及皮肤色素沉着的基础。紫外线辐射(UVR)作为主要外在因素,可通过产生活
性氧(ROS)来调节黑色素的生成,其中,UVB刺激启动黑色素的合成并导致色素
在皮肤表面的积累,在产生色素沉着中发挥主要作用。前B细胞白血病同源盒基因
(pre-B-cellleukemiahomeobox1,PBX1),负责编码转录因子PBX1,在多种组织中广
泛表达并在诸多发育生长过程中发挥其作用。PBX1不仅在胚胎发育中发挥重要作
用,在许多器官中也发挥调控作用。本研究通过构建稳定过表达PBX1的PIG1细
胞,并利用UVB构建黑色素生成模型,探讨PBX1对PIG1细胞生物学行为及功能
的影响,并初步探究在UVB诱导黑色素生成模型中PBX1对PIG1细胞功能、黑色
素生成及保护作用的影响。
目的:
研究转录因子PBX1对PIG1细胞生物学行为及功能的影响,并探讨PBX1在
UVB致PIG1细胞产生黑色素、产生ROS及DNA损伤中的作用及作用机制。确保
表皮黑色素细胞的存活、基因组稳定性及其正常功能,对于抑制色素障碍性疾病、
肿瘤的发生至关重要。因此本研究试图全面了解PBX1在黑色素细胞中发挥的作用,
更好地了解黑色素细胞的生物学及PBX1对黑色素细胞的作用及影响,为色素障碍
性疾病及黑色素瘤的治疗提供理论依据。
方法:
1.利用慢病毒构建稳定过表达的细胞系;通过细胞计数法绘制细胞生长曲线图
及克隆形成实验检验增殖能力;细胞划痕实验检测细胞迁移能力变化;流式细胞术
检测细胞凋亡情况,并辅助WesternBlot法检测凋亡相关蛋白(PARP1、PAR、Cleaved
Casepase3、AIF、CytC)。
I
2.碱裂解法检测细胞黑色素含量;使用分光光度法检测酪氨酸酶活性改变;
WesternBlot检测黑色素生成相关蛋白表达情况;DCFH-DA染料染色观察及流式
细胞术检测ROS生成变化。
3.使用MTT法检测存活率;活细胞工作站观察细胞状态;碱裂解法检测黑色
素含量及分光光度法检测酪氨酸酶活性,选择合适的UVB照射剂量建立UVB照
射产生黑色素的模型。
4.UVB照射细胞后:碱裂解法检测黑色素含量;分光光度法检测酪氨酸酶活性
改变;WesternBlot检测黑色素生成相关蛋白;DCFH-DA染料染色观察及流式细胞
术检测ROS变化;碱性彗星实验检测DNA损伤情况;WesternBlot检测DNA损
伤修复相关蛋白。
结果:
1.PBX1对PIG1细胞生物学的影响
过表达PBX1后:PIG1细胞增殖能力及克隆形成能力增强,迁移能力增强,
凋亡率降低。
2.PBX1对PIG1细胞黑色素及ROS生成的影响
过表达PBX1后:PIG1细胞的黑色素量生成减少,并降低酪氨酸酶活性,黑
色素生成相关蛋白表达下降,同时ROS生成减少。
3.UVB诱导黑色素生成模型
使用不同UVB照射剂量处理细胞,发现在90mJ/cm2细胞活力无明显差异,
黑色素生成量最多,酪氨酸酶活性最强,因此选择90mJ/cm2作为实验剂量。
4.PBX1减少UVB照射引起的PIG1细胞黑色素及ROS生成
过表达PBX1后进行90mJ/cm2的UVB照射处理:
(1)UVB照射组的黑色素含量明显增加,酪氨酸酶活性升高,黑色素生成
相关蛋白的表达升高,同时ROS生成增多。
(2)各组UVB照射后,过表达PBX1组相较于Control组及Vector组黑色
素含量减少,酪氨酸酶活性降低,黑色素生成相关蛋白表达减少,同时ROS生成
减少。
(3)检测到UVB照射可引起DNA损伤增加,DNA损伤修复相关蛋白表达
升高,过表达PBX1能够降低由UVB照射引起的相关指标升高。
您可能关注的文档
- 自支撑电极的制备及在电解本生反应产物制氢中的性能研究.pdf
- 腔内热疗联合同步放化疗对中晚期宫颈癌患者的预后研究及安全分析.pdf
- 铁死亡相关指标与2型糖尿病肾脏疾病的相关性分析.pdf
- 钴氮共掺杂生物炭活化过一硫酸盐去除水中四环素的效能及机制研究.pdf
- 钠葡萄糖共转运蛋白2抑制剂对2型糖尿病患者身体成分的影响:Meta分析.pdf
- 鉴定七氟烷诱导小鼠大脑皮层神经毒性中凋亡相关基因与ceRNA网络.pdf
- 自主导航集群的感知协作算法研究.pdf
- 金属硫_硒化物-碳复合材料的制备及其在锂硫电池中的储能研究.pdf
- 重载液控六足机器人运动轨迹规划研究.pdf
- 邓小平青年思想政治教育理论的重大贡献研究.pdf
文档评论(0)