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林麝γ干扰素基因的克隆及表达的中期报告
前言：
随着生物技术的不断发展，生物学研究中越来越多的基因被发现和克隆。基因克隆技术也成为了现代分子生物学的重要手段之一。本报告主要介绍了林麝γ干扰素基因的克隆及表达的中期研究进展。
介绍：
林麝γ干扰素(IFN-γ)是一种广泛存在于哺乳动物体内的细胞因子，起着重要的调节和免疫作用。IFN-γ的基因长度为1.5kb，编码一种含有166个氨基酸的蛋白。IFN-γ在马麝中也具有重要的应用价值，因此克隆和研究马麝IFN-γ基因对深入了解马麝的免疫系统和促进马麝产业的健康发展具有重要意义。
方法：
1.马麝组织样品的获取和总RNA的提取
从成年马麝体内获取脾脏、淋巴结、骨髓等组织，并迅速冷冻保存。使用TRIzol法从样品中提取总RNA，并经电泳确认RNA的完整性和质量。
2.林麝γ干扰素基因的PCR扩增和克隆
设计引物并合成，通过RT-PCR从马麝总RNA中扩增出IFN-γ基因的cDNA片段。将扩增出的cDNA片段连接到T/A克隆载体中，经过菌落PCR检测，正向克隆出IFN-γ基因cDNA片段。
3.林麝γ干扰素基因的DNA测序
利用ABIPRISM3100DNA测序仪对IFN-γ基因cDNA片段进行测序，以验证克隆出的片段是否正确。
4.林麝γ干扰素基因的表达
将IFN-γ基因cDNA片段亚克隆到含有促进子和末端标签的表达载体中，经过电泳和酶切验证后，将表达载体转入E.coliDH5α意外细胞中，经过IPTG诱导和6×His标签的亲和纯化后，获得IFN-γ蛋白的表达产物。使用西方印迹确定IFN-γ蛋白的分子量和纯度。
结论：
通过以上实验方法，我们成功地克隆出了马麝的IFN-γ基因，并验证了其正确性。同时，我们也成功地表达了IFN-γ蛋白并获得了较高的纯度。这为我们后续进一步探究马麝免疫系统的功能机制奠定了坚实的基础。
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