免疫荧光组织化学技术—荧光显微镜.pptxVIP

病理检验技术

;免疫组化技术;免疫荧光组织化学技术

;免疫荧光组织化学技术

;一、激发滤片的选择

荧光显微镜

一般的荧光显微镜配有紫外、蓝色、绿色和紫色激发荧光滤光片组。激发滤片也有厚、薄两种,厚激发滤片可使荧光显微镜观察视场为暗视场,薄激发滤片为较明亮视场。激发滤片的选择要使荧光明亮而背景适中,背景太亮,会影响荧光的观察；背景太暗,则看不到组织细胞结构。

;一、激发滤片的选择

荧光显微镜

1.UV激发滤片通过的激发光波波长为330~400nm。

2.V激发滤片通过的激发光波波长为395~415nm。

3.B激发滤片通过的激发光波波长为420~485nm,主要用于FICT荧光素标本的观察。

;一、激发滤片的选择

荧光显微镜

4.G激发滤片通过的激发光波波长为460~550nm,主要用于TRICT荧光素标本的观察。

由于FITC和TRITC为最常用的抗体标记荧光素,所以,一些牌子的显微镜专门生产配套有FITC专用激发滤板如KP490滤板和TRITO专用激发滤板如S546滤板。;二、荧光显微镜的使用

1.要提前打开荧光显微镜电源,超压汞灯开启15分钟后光源稳定,适合观察。

开启光源后每次使用不超过2小时,超过2小时光亮强度逐渐下降,观察到的荧光也会变弱。

关闭光源后需要等灯泡冷却