免疫荧光组织化学技术—荧光与荧光素.pptxVIP

病理检验技术

;免疫组化技术;免疫荧光组织化学技术

;荧光与荧光素

一、荧光

在一定波长的光如紫外光等照射后,某些物质吸收照射光后被激发出的比照射光波长更长的可见光,称为荧光(fluorescence)。

荧光寿命很短,一般约为10-9~10-8秒,所以当紫外光停止照射后荧光便马上消失,但这种消失并非为荧光淬灭现象。

;荧光与荧光素

一、荧光

荧光淬灭是指标记了抗体的荧光素或与组织细胞结合的荧光染料,在染色过程中与各种试剂的作用,长时间保存尤其是在高温环境或经过长时间紫外光照射后,使荧光素被激发出荧光的能力减弱,甚至消失。

因此,免疫荧光染色结果难以长时间保存。

;荧光与荧光素

荧光可分为以下两种:

（一）诱发荧光

一些物质本身不能发出荧光，但经过标记荧光素或经荧光染料染色后,经过紫外光照射激发荧光素或经荧光染料发出的荧光称为诱发荧光。

经免疫荧光染色后观察到的组织细胞中的荧光属于诱发荧光。

（二）自发荧光

一些物质如血红蛋白等本身在紫外光照射后,能发出荧光,这种荧光称为自发荧光。自发荧光相对较弱,但也是造成免疫荧光非特异性染色的原因之一。

;二、激发光

激发光是由荧光显微镜光源发出,激发引起荧光最有效的是波长较短的紧外光和蓝紫光,而荧光的亮度与光源发出的激发光强度成正比。

因此,荧光显微镜所用的激发光源要求强度大,常用高