GBT575012202372大肠埃希氏菌测定滤膜法方法验证报告.pdf

方法验证报告

项目名称：生活饮用水大肠埃希氏菌的检测（滤膜法）

《生活饮用水标准检验方法第12部分：微生物指标》

方法名称：

GB/T5750.12-2023/7.2滤膜法

报告编写人：

参加人员：

审核人员：

报告日期：

1实验室基本情况

1.1人员情况

表1参加验证的人员情况登记表

姓名性别年龄职务或职称所学专业从事相关专业年限

1.2检测仪器/设备情况

表2使用仪器情况登记表

设备名称规格型号仪器出厂编号计量/检定状态

电热恒温培养箱

单人净化工作台

立式压力蒸汽灭菌器

三用紫外分析仪

电子天平

1.3检测用试剂情况

表3使用试剂登记表

试剂名称生产厂家级别规格备注

MUG营养琼脂培养

基(NA-MUG)

大肠埃希氏菌

质控样品

1.4环境设施和条件情况

实验室具有检定合格的温湿度计，环境可以控制在温度1826℃，湿度

45%65%的要求范围内，满足检测环境条件，实验室人员每天对环境条件进行

监控。另外实验室配备了洗眼器、喷淋设施、护目镜、灭火器等的安全防护措

施，符合实验室安全内务的要求。

2实验室检测技术能力

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2.1原理

用孔径为0.45um的微孔滤膜过滤水样后，将滤膜贴在选择性培养基上培养后，

能形成典型菌落，经革兰氏染色和证实试验后，来检测水中总大肠菌群的方法。

2.2试验步骤

2.2.1准备工作

2.2.1.1滤膜灭菌：将滤膜放入烧杯中，加入纯水，置于沸水浴中煮沸灭菌3

次，每次15分钟。前两次煮沸后需更换纯水洗涤2-3次，以出去残留溶剂。或

使用符合要求的一次性无菌滤膜。

2.2.1.2滤器灭菌：用点燃的酒精棉球火焰灭菌。也可用高压蒸汽灭菌器121℃

高压蒸汽灭菌20min。

2.2.2过滤水样

用镊子夹取无菌滤膜边缘部分，将粗糙面朝上，贴放在已灭菌的滤床上，固定

好滤器，将100ml水样（如水样含菌数较多，可减少过滤水样量，或将水样稀

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释）注入滤器中，打开滤器阀门，在-5.07×10pa（-0.5大气压）下抽滤。

2.2.3接种培养

过滤完水样后再抽气5s，关上滤器阀门，取下滤器，用灭菌镊子夹取滤膜边缘

部分，移放在品红亚硫酸钠培养基上，滤膜截留细菌面朝上，滤膜应与培养基

完全贴紧，两者间不得留有气泡，然后将培养皿倒置，放入恒温培养箱内，（36

±1）℃培养24h±2h。将总大肠菌群滤膜法有典型菌落生长的滤膜进行大肠埃

希氏菌检测。在无菌操作条件下将有典型菌落生长的滤膜转移到NA-MUG平板上，

滤膜截留细菌面朝上，滤膜应与培养基完全贴紧，两者间不得留有气泡，然后

将培养皿倒置，放入恒温培养箱内，（36±1）℃培养4h。

2.2.4试验数据处理

将培养后的NA-MUG平板在暗处用波长为366nm的紫外灯照射，如果菌落边缘或

菌落背面有蓝色荧光产生，则表示该菌落为大肠埃希氏菌。记录有蓝色荧光产

生的菌落数，按下面公式计算滤膜上生长的大肠埃希氏菌落数，以每100ml水

样中的大肠埃希氏菌落数（CFU/100ml)报告结果。

数出的大肠埃希氏菌落数100100

大肠埃希氏菌菌落数（CFU/100ml)