细胞的培养与传代-1.pptVIP

动物细胞的传代及兔多克隆抗体的制备一、原代培养概念：取自体内新鲜组织并置于体外条件下生长的细胞在传代之前称为原代培养。原代培养技术的重要意义:原代培养的最大优点是细胞刚刚离体，生物性状尚未发生很大变化，具有二倍体的遗传性，而且大多数细胞表现出原来组织的特性。利用原代培养做各种实验，如药物测试、细胞分化及病毒学方面的试验效果很好。原代培养也是建立各种细胞系（株）必须经过的阶段。消化法：这种培养过程主要是采用无菌操作的方法，把组织（或器官）从动物体内取出，经酶消化处理，使分散成单个细胞，然后在人工条件下培养，使其不断地生长和繁殖。动物细胞原代培养流程的示意图细胞的传代培养器材和液体的准备细胞培养用的器材培养瓶、枪头、刮刀等在灭菌干净以后备用，离心机、培养箱、二氧化碳、倒置显微镜、超净工作台等。培养试剂等M199培养基、1640培养基、DMEM培养基、血清、胰酶、双抗、PBS等。方法与步骤（一）贴壁细胞传代培养（1）选取生长良好的细胞，在超净工作台的酒精灯旁，倒去瓶中的旧培养液，加入2～3ml的PBS液，轻轻振荡漂洗细胞，以除去悬浮在细胞表面的碎片(思考：还有什么作用？）（2）加入适量0.１％－0.25％胰蛋