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无选择标记植物表达载体的构建及转基因大豆的获得的中期报告
本文提供无选择标记植物表达载体的构建及转基因大豆的获得中期报告。
简介
转基因技术是基于DNA重组技术，将外源基因嵌入宿主细胞基因组中，使其表达外源基因，在植物育种、医学研究、农业种植等方面具有广泛应用。常见的转基因植物构建方法是将筛选基因质粒构建成植物表达载体，利用农杆菌介导的遗传转化技术将载体进入植物体细胞，然后筛选出含有转基因的植株。传统的筛选方法是在转化过程中加入抗生素或草甘膦等对野生型细胞有毒作用的抑制剂，使得只有含有抗生素或草甘膦抗性基因的转基因植株能够存活。然而，这种筛选方法也会带来一些负面影响，如引起环境污染和基因转移等问题。
为了克服这些缺点，我们构建了一种无选择标记植物表达载体，其中基因构造包括：启动子，基因编码区域，多克隆位点和终止子。该载体避免了使用抗生素和草甘膦的选择标记，轻松地实现转基因大豆的构建。
材料和方法
1.构建载体：该载体使用多克隆位点和限制性酶切割过程，将目的基因的编码区域和其他元件插入到表达载体中。所选的目的基因是植物干旱逆境响应蛋白基因AtRD22。
2.大豆遗传转化：使用稻瘟病尔银杆菌作为介导体，在大豆品种Williams82中利用农杆菌介导的遗传转化技术将表达载体（含有AtRD22基因）导入。
结果
我们成功地构建了一个无选择标记植物表达载体，并成功将AtRD22基因导入Williams82大豆品种。通过PCR分析，在转化过程中筛选出84个植株，并确认其中54个大豆植株带有转入基因的提示。其中49个植株成功转化为转基因大豆，并在T1代中得到扩增。
讨论
本研究成功构建了一个无选择标记的植物表达载体，并成功地将AtRD22基因导入了Williams82大豆品种。通过PCR筛选，我们发现有54个大豆植株带有转入基因的提示，其中49个成功转化成转基因大豆。这表明，无选择标记植物表达载体可以作为一种有效的转基因植物构建方法，可以避免抗生素和草甘膦带来的负面影响，同时还可以实现高效的转基因植株筛选。本研究对于为基因改良提供了一种新的策略，并进一步加强了转基因作物的可持续发展。
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