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lncRNA研究策略与技术

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lncRNA研究策略与技术

研究背景：

长链非编码RNA(longnoncodingRNA，lncRNA)是一类不编码蛋白的RNA分子，长度在200bp以上，起初被认为是RNA聚合酶II转录的副产物，不具有生物学功能；近期的研究表明lncRNA具有保守的二级结构，可以与蛋白、DNA和RNA相互作用，参与多种生物学过程的调控，尤其在肿瘤当中发挥了重要的调控角色，如染色质修饰、转录激活和抑制、转录后调解以及作为miRNA的诱导分子干扰基因的表达等，图1所示。随着高通量测序技术的发展，越来越多的lncRNA被注释，但是绝大多数的lncRNA的功能仍然不清楚，因此lncRNA的研究是一片非常广阔的未知领域，具有极大的研究价值和意义。

图1.lncRNA参与肿瘤生物学调控，红色线状图表示lncRNA。A.染色质重组B.转录激活和抑制C.蛋白抑制D.转录后修饰E.诱导分子

锐博生物提供研究思路：

差异lncRNA筛选的研究方法：

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案例解读：

案例(一)RNAseq发现lincRNA

2011年，Rinn研究小组对24种组织样本进行RNA测序发现了8000多个人的lincRNA

图2.A.利用RNA-seq预测lincRNA的流程图B.多个参考数据库找到的lincRNA的数量及交集及用软件组装的结果

lincRNA的表达具有组织特异性

图3.lincRNA和mRNA在不同组织当中的表达情况

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案例(二)lncRNA可以成为各种肿瘤的生物标志物

2012斯坦福大学医学院研究人员进行首个大型的癌症lncRNA表达谱分析。对64个肿瘤样品高通量测序，在各种肿瘤类型之间找出差异表达的1065个已知的以及1072新的lncRNA。

图4.肿瘤和对照样品lncRNA表达谱分析

案例(三)lncRNA表达谱芯片结合lncRNA-mRNA共表达网络筛选关键lncRNA

第二军医大学的研究人员利用2/3肝部分切除(PH)小鼠在不同的时间点，针对肝脏再生过程进行了全基因组lncRNA芯片表达谱分析。通过lncRNA和mRNA共表达网络分析找到了一个非常有意义的长链非编码RNA(lncRNA-LALR1)，并结合体内外实验证实在肝再生过程中lncRNA-LALR1通过激活Wnt/β-Catenin信号加速细胞周期进程，促进了肝细胞增殖。因此采用药物干预靶向lncRNA-LALR1诱导肝脏再生，有可能有益于肝衰竭和肝移植治疗。

1.表达谱芯片检测肝脏生长相关的lncRNA

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图5.表达谱芯片聚类分析小鼠肝脏2/3切除后0，1.5，12和24小时1231个lncRNA和

3141个mRNA表达谱

2.KEGGpathway分析与肝脏生长相关的信号通路

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图6.Pathway分析展示最相关的信号通路

3.共表达网络分析找到关键的lncRNA-LALR1

图7.部分共表达网络分析，包含22个基因，18个lncRNA(k-core=12),4个mRNA(k-core=11anddegrees≥28)，位于中心位置的是lncRNA-LALR1

案例(四)lncRNA功能研究

研究者对位于HOXA基因簇的5‘端启动子区域的非编码RNAHOTTIP进行了功能研究，研究证明HOTTIP可以增强HOXA的转录；对HOTTIP体内外的干扰研究发现HOTTIP在发育过程中起到重要作用，例如影响鸡远端骨的形成。

RT-PCR和FISH结果验证lncRNAHOTTIP的表达具有组织中特异性

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