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输血科自身免疫溶血性贫血患者血清学检查
1、目的：规范实验室工作人员的操作程序，确保实验过程及结果的准确性与可靠性。
2、范围：本规程适用于本实验室自身免疫溶血性贫血患者的试验检查操作。
3、职责
3.1工作人员对进行红细胞意外抗体筛查和鉴定试验技术操作应熟练掌握。
4、AIHA患者血清学检查
4.1基本原理
自身免疫性溶血性贫血（AIHA）是一种临床常见疾病，患者体内自身抗体导致红细胞寿命缩短，失代偿后即出现贫血症状。AIHA可以分为温抗体型、冷抗体型（CAS）、混合型、阵发性冷性血红蛋白尿（PCH）以及药物诱导型（DIIHA）。
自身抗体引起的配血不相合，是困扰医护人员和输血科实验室无法做出输血决策的疑难问题之一。AIHA患者血清学上还有一个重要特征，就是合并存在意外抗体的比率要明显大于非AIHA患者。意外抗体的存在，使AIHA患者的输血风险进一步加大，自身抗体可能会掩盖意外抗体，导致意外抗体漏检而引起溶血性输血反应。
4.2基本内容
本节介绍的方法主要用于识别或去除温自身抗体、冷自身抗体以及药物性抗体，消除其对常规相容性试验的干扰，更好地发现、鉴定意外抗体，提高AIHA患者地输血安全性，也可以为临床诊断提供实验室依据。试验内容分别为直接抗人球蛋白试验、冷自身抗体的吸收试验、冷自身抗体的特异性鉴定试验、冷凝集抗体效价测定试验、巯基试剂处理红细胞自凝集试验、温自身抗体的吸收试验、同种红细胞吸收自身温抗体试验、冷热溶血试验、通过药物处理红细胞检测药物抗体、通过存在的药物检测药物性抗体。
4.3直接抗人球蛋白试验
4.3.1方法原理
利用抗人球蛋白试剂可以与患者体内已经被抗体或者补体致敏的红细胞产生凝集反应，用以检查红细胞是否已经在体内被抗体（自身抗体或意外抗体）致敏。
4.3.2仪器、试剂与耗材
1）仪器：台式低速离心机、血型血清学专用离心机、阅片灯箱、显微镜、试管架、全自动检测系统（条件具备时）。
2）试剂：0.9%生理盐水；多特异性抗人球蛋白试剂（IgG/C3d）、单特异性抗IgG抗体、单特异性抗人C3d抗体、微柱凝集抗人球蛋白卡（多特异性、单特异性）、稀释液。
3）耗材；硬试管、一次性塑料滴管、载玻片、记号笔等。
4.3.3标本要求
1）推荐使用EDTA抗凝静脉血，静脉血管条件不好或紧急情况下也可以使用动脉血，标本采集量≥3mL；
2）标本标识清晰、准确、完整，能反映受血者当前的免疫学状态；
3）标本质量符合要求，无血液稀释、细菌污染，离心后无溶血及明显乳糜；
4）标本采集后应及时进行相关检测。
4.3.4操作步骤
Ⅰ、试管法
1）受检红细胞经生理盐水洗涤3次后，配制成2%-5%红细胞生理盐水悬液。
2）取洁净试管，做好标记，分别加入2%-5%红细胞生理盐水悬液1滴和多特异性抗人球蛋白试剂1滴（或遵照试剂使用说明书）。
3）以1000g离心15秒，观察有无红细胞凝集。
4）试验结果为阴性，试验结束。
5）试验结果为阳性，可以根据需要，选择是否继续使用抗IgG和抗C3d抗人球蛋白试剂重复（2）、（3）步骤，确认红细胞致敏类型。
Ⅱ、微柱凝集法
1）手工操作：参照微柱凝集抗人球蛋白卡说明书操作。
2）全自动检测：参照全自动检测系统使用说明书操作。
4.3.5结果判定与解释
阳性结果：红细胞形成凝集或发生溶血；说明受检红细胞已被抗体和（或）补体致敏。
阴性结果：红细胞无溶血，肉眼及镜下均未见凝集。说明受检红细胞未被抗体或补体致敏。
4.3.6室内质控
详见红细胞意外抗体筛查试验盐水抗人球蛋白法。
4.3.7室间质评：不适用。
4.3.8注意事项：
1）受检红细胞必须经过充分洗涤，以去除游离抗体和红细胞表面黏附的蛋白。
2）添加抗人球蛋白试剂后，IgG致敏的红细胞通常在直接离心后出现凝集，补体致敏的红细胞通常是经过室温孵育一段时间后离心检测出来。
3）多数WAIHA同时存在抗IgG和抗C3d，在多特异性抗人球蛋白试剂作用下呈阳性结果；少数情况下，红细胞表面只有IgG或补体C3d；极少数个体多特异性抗人球蛋白试剂为阳性，单独使用抗IgG或者抗C3d血清为阴性，可能是抗IgM和抗IgA抗体致敏。
4）混合型AIHA的患者同时可以检出IgG和补体C3d。
5）CAS和PCH患者只有抗补体C3d阳性，而抗IgG阴性。
4.4冷自身抗体的吸收试验
4.4.1方法原理
冷自身抗体的存在是较为普遍的现象，但一般效价都不高，而冷凝集素综合征（CAS）患者的冷自身抗体效价通常都很高。高效价的冷自身抗体会干扰ABO血型鉴定、交叉配血以及掩盖血清中可能同时存在的有临床意义的意外抗体。因此需要用自身红细胞吸收去除自身冷抗体，以消除其对血型鉴定和抗体筛查（鉴定）的影响。
4.4.2仪器、试剂与耗材
1）仪器：台式低速离心机、血型血清学专用离心机、4℃冰箱
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