人教C版高中生物选择性必修3微专题2PCR技术与凝胶电泳课件.pptVIP

第3章微专题2PCR技术与凝胶电泳一、PCR中的相关计算1.PCR过程模型2.PCR中的数量关系复制次数123nDNA分子数2482n含其中一种引物的DNA分子数1=21-13=22-17=23-12n-1同时含两种引物的DNA分子数0=21-22=22-26=23-22n-2共消耗引物的分子数2=22-26=23-214=24-22n+1-2含与两条脱氧核苷酸链等长的DNA分子数0=21-20=22-42=23-62n-2n典例突破例1“X基因”是DNA分子上一个有遗传效应的片段,若要用PCR技术特异性地拷贝“X基因”,需在PCR反应中加入两种引物,两种引物及其与模板链的结合位置如图甲所示。经4轮循环后,产物中有五种不同的DNA分子,如图乙所示,其中DNA分子③和④有()甲乙A.8个 B.6个C.4个 D.2个B解析由图分析可知,“X基因”第1次复制得到两个DNA分子:①和②各1个;“X基因”第2次复制得到4个DNA分子:①复制得①和③、②复制得②和④;“X基因”第3次复制得到8个DNA分子:①复制得①和③、③复制得③和⑤、②复制得②和④、④复制得④和⑤;“X基因”第4次复制得到16个DNA分子:①复制得①和③、②复制得②和④、2个③复制得2个③和2个⑤、2个④复制得2个④和2个⑤、2个⑤复制得4个⑤。从上面的推测可知,经4轮循环后,产物中有8个⑤、3个④、3个③、1个②、1个①。因此,经4轮循环后,产物中DNA分子③和④有3+3=6(个)。二、电泳图谱的识别电泳是带电物质在电场中向着与其电荷相反的电极移动的过程。各种生物大分子在一定的pH条件下,可以解离成带电荷的离子,在电场中会向相反的电极移动。含有电解液的凝胶在电场中,其中的带电离子会发生移动,此时移动的速度可因离子大小、形态及电荷量的不同而有差异。利用移动速度差异,就可以区别各种大小不同的分子。琼脂糖凝胶电泳是分子生物学实验室中分离鉴定核酸的常规方法。核酸是两性电解质,在常规的电泳缓冲液中(pH约8.5),核酸分子带负电荷,在电场中向正极移动。线状双链DNA分子在一定浓度琼脂糖凝胶中的迁移速率与DNA分子量对数成反比,分子越大则所受阻力越大,也越难于在凝胶孔隙中移动,因而迁移得越慢。典例突破例2现有一长度为3000碱基对(bp)的线性DNA分子,用限制性内切核酸酶酶切后,进行凝胶电泳,使降解产物分开。用酶H单独酶切,结果如图1。用酶B单独酶切,结果如图2。用酶H和酶B同时酶切,结果如图3。该DNA分子的结构及其酶切图谱是()A解析从题图所示的结果看,酶H单独酶切时会将DNA分子切割成两种长度(分别为2000bp、1000bp),可以排除D选项;酶B单独酶切时将DNA分子切割成三种长度(分别为2000bp、600bp、400bp),由此可排除B、C两项。三、DNA片段电泳与遗传试题的综合琼脂糖凝胶电泳能够用于分离、鉴定和纯化DNA片段。等位基因是由基因突变而来,一对等位基因A、a经过限制酶切割后形成的DNA片段,分子量不同,因此在电场作用下,移动距离不同,最终使得A、a得以分开,形成不同的条带。本类题型是对遗传定律、基因型与表型的关系、基因检测以及DNA片段凝胶电泳等的综合性考查,需要根据基因电泳鉴定获得的带谱判断亲本的基因型和遗传类型,然后根据亲代基因型写出后代可能的基因型,结合后代的基因定位鉴定获得的带谱,确定相关个体的基因型。典例突破例3肾上腺脑白质营养不良(ALD)是伴X染色体隐性遗传病(致病基因用a表示)。少数女性杂合子会患病,这与女性核内两条X染色体中的一条会随机失活有关。下图1为某患者家族遗传系谐图,利用图中四位女性细胞中与此病有关的基因片段进行PCR,产物经酶切后的电泳结果如图2所示(A基因含一个限制酶切位点,a基因新增了一个酶切位点)。下列叙述正确的是()图1图2A.Ⅱ-2个体的基因型是XaXaB.Ⅱ-3患ALD的原因可能是来自母方的X染色体失活C.a基因新增的酶切位点位于310bpDNA片段中D.若Ⅱ-1和一个基因型与Ⅱ-3相同的女性婚配,后代患ALD的概率为1答案C解析肾上腺脑白质营养不良(ALD)是伴X染色体隐性遗传病。由图2推测可知Ⅱ-4的基因型为XAXA,Ⅰ-1、Ⅱ-2、Ⅱ-3都含有与Ⅱ-4相同的条带,故都含有A基因,故Ⅰ-1、Ⅱ-2、Ⅱ-3的基因型均为XAXa,A项错误;Ⅱ-3个体的基因型是XAXa,据题可知其父方Ⅰ-2的基因型为XAY,故其XA来自其父亲,Xa来自母亲,但含XA的Ⅱ-3依然表现为患病,故推测其患ALD的原因可能是来自父方的X染色