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鳜补体经典途径基因的克隆和组织表达的任务书

任务：克隆和表达鳜补体经典途径基因

背景：

鱼类作为水生动物，面临着不同于陆生动物的感染和免疫压力。鳜是一种淡水鱼类，其免疫系统受到各种水生病原微生物的挑战。补体经典途径作为重要的免疫组分，在抵御病原微生物的侵袭中发挥着重要的作用。鳜补体经典途径基因在对水生病原微生物的防御中起着关键作用。因此，对鳜补体经典途径基因的研究具有重要的意义。

任务要求：

1.从鳜的基因组DNA中克隆出鳜补体经典途径基因；

2.将鳜补体经典途径基因克隆到表达载体中，构建表达载体；

3.在适当的宿主中表达鳜补体经典途径基因，并纯化表达产物；

4.进行组织表达分析，研究鳜补体经典途径基因的组织表达模式。

参考方法：

1.DNA克隆：PCR扩增法、限制性内切酶切割法、接头PCR法等；

2.载体构建：TA克隆法、限制性内切酶切割法、Ligation-DependentCloning法等；

3.表达宿主：细胞系、酵母系统等；

4.表达纯化：蓝光亲和层析法、Ni-NTA亲和层析法等；

5.组织表达分析：实时荧光定量PCR法、Northernblotting法等。

参考文献：

1.Mellroth,P.,Steiner,H.(2006).AnalysisoftheDrosophilaimmuneresponseduringbacterialinfectionandaging.PLoSBiol,4(8),e229.doi:10.1371/journal.pbio.0040229

2.Garcia-Casas,A.,Garcia-Moreno,D.,Luque,A.,Gómez-Ramos,M.M.,Cano,M.J.(2013).IsolationandcharacterizationofthefirstamphioxusclassicalcomplementpathwayC3andC4genesrevealunusualfeaturesforvertebratecomplementgenes.Journalofimmunology(Baltimore,Md.:1950),190(8),3615–3628.doi:10.4049/jimmunol.1202110