LC3000现场培训教程.pptx

v色谱的起源(色谱法是什么？)

v色谱法最早出现，是俄国植物学家Tswett于1903年在波兰华沙大学研究植物的叶子组成时，用碳酸钙作为吸附剂，分离植物干燥叶子的石油醚萃取物；植物的色素吸附在管内的碳酸钙里，再用纯净的石油醚洗脱被吸附的色素，于是管内的碳酸钙上形成了三种颜色的6个色带。当时，Tswett把这种色带叫做“色谱”，其英文译名为Chromatography。这一方法中的碳酸钙成为“固定相”，而纯净的石油醚被称为“流动相”。Tswett的方法就成为液固色谱（Liquid－Solid

Chromatography）。

TewettM,BerDtschBotGes,1906;24:316.

一、色谱技术回顾

一、色谱技术回顾

二、高效液相色谱法及色谱基本语言

三、培训设备

四、溶剂准备

五、LC3000色谱仪组成

六、LC3000系统基本操作

七、HPLC维护知识

内容

起源

Tewett

1903

色谱法的原理

图形化解释色谱法

100米短跑

.8位选手位于起跑线上开始：(样品溶液在进样阀))

.跑道阻力,空气阻力：（色谱柱）

.肌肉动力:（输液泵）

.拍照和终点线：(检测器)

.秒表：（工作站)

色谱技术回顾

色谱分离的机理

★★色谱分离是一个物理的过程

流动相（MobilePhase）

固定相（StationaryPhase）

样品（溶解于流动相中的溶质）

v常规分类方法

按流动相的物态分:

–气相色谱(GasChromatography,GC)用气体作为流动相(又叫载气)

–液相色谱(LiquidChromatography,LC)用液体作为流动相(又叫洗脱剂)

-超临界流体色谱

（是指使用条件，超过了流动相的临界温度和压力，以CO2为代

表）

按固定相的形态分:

–平面色谱

口纸口色谱

口薄口层色谱

–柱色谱

按流动相和固定相的相对极性分:

–正相色谱(NormalPhaseChromatography)

反相色谱最常用的流动相及其洗脱强度：

水甲醇乙腈乙醇丙醇异丙醇四氢呋喃最常用的流动相组成“甲醇-水；乙腈-水”

正相色谱最常用的流动相及其洗脱强度：正己烷乙醚乙酸乙酯异丙醇

**应用添加剂，成为离子对、离子抑制方法

口固口定相的极性大于流动相

–反相色谱(ReversedPhaseChromatography)

口固口定相的极性小于流动相

色谱技术回顾

按分离过程的机理分:

.–吸附色谱(AbsorptionChromatography)

•口据样品组分对活性固定相表面吸附亲和力的不同实现分离

.–分配色谱(PartitionChromatography)

•口离基于样品组分在固定相和流动相中的溶解度(分配系数)不同

.–离子交换色谱(IonExchangeChromatography)

•口据样品组份离子交换亲和力的差异分离,简称离子色谱(IC)

.–体积排除色谱(SizeExclusionChromatography)

•口GC(GelPermeationChromatography)凝胶渗透色谱法––固定相是疏水性凝胶,流动相是有机溶剂

•口GC(GelFiltrationChromatography)凝胶过滤色谱法––固定相是亲水性凝胶,流动相是水溶液

色谱技术回顾

什么是高效液相色谱

HighPerformanceLiquidChromatography

.高效液相色飞法，飞称：HPLC

是一种区飞于飞典液相色飞；基于飞器方法的高效能分离手段：

.高性能的色飞柱，高精度、耐高飞的飞液飞以及高灵敏度的飞飞器……

广泛飞用于各个飞域：

.医飞/飞保/石化/生命科学/食品及

飞飞……

与经典液相色谱（柱色谱）比较

发展

液相色谱仪的两大主要用途

色谱图：HPLC图形结果(

Chromatogram）

←色谱峰

峰高

峰宽

保留时间（分）

基线↓

响应值

峰高－PeakHeight

.峰最大闪到峰底的距离

半（高）峰闪－PeakWidthatHalfH