SN 1376.1-2004牛传染性胸膜肺炎病原分离鉴定.docxVIP

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

SN/T1376.1—2004

牛传染性胸膜肺炎病原分离鉴定

Isolationandidentificationofcontagiousbovinepleuropneumonia

2004-06-01发布

2004-12-01实施

中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局

发布

I

SN/T1376.1—2004

前言

本标准的附录A是规范性附录。

本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。

本标准起草单位：中华人民共和国四川出入境检验检疫局。

本标准主要起草人：李玉冰、严玉宝、曹同雪、曹宗君、胡娟、马勇。

本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。

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SN/T1376.1—2004

牛传染性胸膜肺炎病原分离鉴定

1范围

本标准规定了牛传染性胸膜肺炎病原的分离与鉴定方法。

本标准适用于牛传染性胸膜肺炎病原的分离与鉴定。

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准中引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是

否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T6682—1992分析实验室用水规格和试验方法

3设备

3.1灭菌拭子。

3.2恒温培养箱。

3.3普通显微镜。

3.4穿刺针及注射器。

3.5净化工作台。4培养基

4.1试验用培养基包括运输培养基、10%马血清肉汤培养基、10%马血清肉汤琼脂培养基、普通10%马血清肉汤琼脂培养基、葡萄糖生化培养基、精氨酸生化培养基和四氮唑盐生化培养基。

4.2培养基配制方法见附录A。

4.3实验用水应符合GB/T6682—1992中的二级水标准。

5样品的采集、运输和保存

5.1活牛的样品采集

用灭菌拭子采集鼻分泌或用注射器无菌穿刺采取胸腔液。

5.2死牛的样品采集

无菌采取肺部病变组织、肺部淋巴结、胸腔液、有关节炎的采取关节滑液。

5.3样品的运输

样品需长途运递的应将其置于运输培养基内，于4℃条件下48h内送达实验室。

5.4样品的保存

采集的样品无法立即送实验室的或者实验室不能立即检验的，应将样品置—20℃保存。

6病原分离培养

6.1样品的处理

6.1.1污染样品：将病料置于含500IU/mL青霉素及1:7000乙酸铊的肉汤中磨碎，10倍稀释后4℃

过夜，供接种用。

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SN/T1376.1—2004

6.1.2无污染样品：无菌抽取的胸腔液、关节滑液可直接接种。

6.2样品的接种

6.2.1取0.1mL～0.3mL样品无菌接种于5管10%马血清肉汤培养基中，置37℃培养直至第10d。6.2.2用无菌接种环钩取样品划线接种于10%马血清肉汤琼脂培养基上，每个样品共接种5个培养

皿。每个培养皿用胶布或者蜡封口，置37℃培养直至第10d。

6.3生长观察

6.3.1接种后第3d开始每天观察接种管及培养皿细菌生长情况直至第10d。

6.3.2在10%马血清肉汤试管中，牛传染性胸膜肺炎病原的生长表现为：初期呈轻微混浊或白色点状或丝状，后逐渐均匀混浊，呈半透明稍带乳光，无菌膜或沉淀，也无颗粒悬浮。

6.3.3在10%马血清肉汤琼脂培养基上，牛传染性胸膜肺炎病原的生长表现为：生长迟缓，为水滴状圆形略带灰色的微小菌落，中央有乳头状突起，呈“煎蛋”样外观，菌落直径约0.2mm～2.0mm。

6.4将可疑菌落或可疑肉汤培养物接种于普通10%马血清肉汤琼脂培养基，培养3d～4d,连传三代进行纯化，供病原鉴定用。

7病原鉴定

7.1培养特性

7.1.1挑取菌落接种10%马血清肉汤培养基中3d～5d后观察结果。牛传染性胸膜肺炎病原生长表现如6.3.2所述。

7.1.2挑取菌落接种在普通10%马血清肉汤琼脂培养基上，3d～5d后观察结果。牛传染性胸膜肺炎病原生长表现如6.3.3所述。

7.2染色镜检

挑取典型菌落，涂于玻片上，自然干燥，用5%铬酸水溶液固定2min,水洗，浸入用蒸馏水1:30稀释的姬姆萨氏染色液，4℃过夜，取出用蒸馏水轻轻冲洗，自然于燥后用800倍～1000倍显微镜观察。病原在显微镜下表现为多形态，以球形最常见，也可见杆状、丝状、环状、星状者，长度为125nm~

250nm。

7.3生化试验

挑取纯化菌落分别接种葡萄糖生化培养基、精氨酸生化培养基和四氮唑盐生化培养基，37℃培养3d～5d后观察结果。牛传染性胸膜肺炎病