SN∕T 5178-2021 按蚊属分子鉴定方法.pdf

ICS11.020

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中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

SNIT5178-2卫1

按蚊属分子鉴定方法

MolecularidentificationforgenusAnopheles

2021-06-18发布2022-01-01实施

中华人民共和国海关总署发布

SNff5178-2021

前

本文件按照GB厅1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规

定起草。

本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。

本文件起草单位：中华人民共和国南京海关、中华人民共和国福州海关、中华人民共和国北京

海关、中国检验检疫科学研究院。

本文件主要起草人：杨庆贵、何江、朱军、吴瑜凡、孙立新、张建庆、郭惠琳、黄恩炯、胡双双、

聂国援、袁大炜、郭天字、陆永昌。

I

SNff5178-2021

按蚊属分子鉴定方法

1范围

本文件规定了按蚊（AnophelesMeigen,1818）成虫（包括肢体残缺不全的成虫）及踊、幼虫、卵的。

本文件适用于按蚊属分子的鉴定。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文

件，仅该日期对应的版本适用于本文件，不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适

用于本文件。

GB厅6682分析实验室用水规格和试验方法

GB19489实验室生物安全通用要求

SN厅1876医学媒介生物标本采集、制作及保存规程

SN厅2752.4卫生检疫人员的自我防护规范第4部分z实验室人员

SN厅4278国境口岸医学媒介昆虫DNA条形码鉴定操作规程

SN厅4629检疫性有害生物凭证标本核酸制备、保存与管理规范

WSff230临床诊断中聚合酶链反应（PCR）技术的应用

3术语和定义

SN厅4629和SN厅4278界定的术语和定义适用于本文件。

4原理

利用BOLD中规定的通用引物对线粒体DNA中的COi基因的特定片段进行扩增，PCR产物克隆

或者直接测序后，得到长度不少于500坤的有效序列，跟BOLD系统中的数据进行比对，从而达到

物种快速准确鉴定的目的。

5引物

LC014905’－GGTCAACAAATCATAAAGATATIGG斗’

HC021985’-TAAACTICAGGGTGACCAAAAAATCA-3’

6鉴定程序

6.1准备

实验室需具备的设备和试剂见附录A，实验室生物安全应符合GB19489（所有部分）中的规定，

人员防护应符合SN厅2752.4（所有部分）中的的规定；PCR防污染措施应按照WSlf230确定的执行。

I

SN.厅5178-2021

6.2标本的处理

6.2.1取样

对所检测的标本进行唯一性标示。新鲜标本（包括卵、幼虫、踊及成虫）及时冷冻或者毒瓶处死

后，投入大于90%（体积分数）的酒精固定：截获的干燥标本和死标本直接投入大于90%（体积分数）

的乙醇溶液固