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小鼠肌肉卫星细胞的原代培养和鉴定的中期报告

本次实验进行了小鼠肌肉卫星细胞的原代培养和鉴定，下面是中期报告。

一、实验流程：

1、制备培养基：使用DMEM/F12、10%FBS、1%P/S。将DMEM/F12加热到37℃，加入10%FBS、1%P/S，混合均匀后放置于4℃冰箱。

2、制备卫星细胞离心液：取新鲜小鼠肌肉组织，剪成小块后用1ml无血清DMEM/F12悬浮，细胞以1×10^8/ml的密度均匀悬浮。

3、分离卫星细胞：将离心液倒入培养皿内，放在37℃、5%CO2恒温培养箱内培养3h，培养基加2%凝血素，使细胞粘附于培养皿上。将培养皿内的细胞5分钟浸泡于PBS内，反复三次。加入10mlDMEM/F12，剪成细胞块状的肌肉组织刮下细胞，将细胞转移至无血清DMEM/F12培养基内继续培养。

4、细胞鉴定：在细胞培养前，使用免疫荧光法分析卫星细胞标记物Pax7和MyoD表达情况。

二、实验进展：

目前已完成卫星细胞离心液的制备和卫星细胞的分离培养。初步观察到细胞贴壁生长，但由于还未完成细胞的鉴定，无法确定培养的细胞是否为卫星细胞。下一步将进行细胞的Pax7和MyoD表达情况检测，以确定细胞身份。

三、可能遇到的问题：

1、细胞密度不足：细胞离心液中的细胞密度不足可能会导致细胞贴壁率低，生长缓慢甚至死亡。

2、细胞污染：由于实验条件不完全无菌，可能导致细胞污染，从而可能影响细胞的结果。

3、误鉴定：细胞的Pax7和MyoD表达检测可能会出现误鉴定结果，需要多次验证来确定细胞身份。