现代分子诊断技术.ppt

原位杂交（nucleicacidhybridizationinsitu）将标记探针与细胞或组织切片中的核酸进行杂交，进而检测特异的DNA或RNA序列细胞原位杂交组织切片原位杂交DNA-DNARNA-DNA三类杂交RNA-RNA该法优点：不需提取核酸，故可完整保持组织或细胞的形态，因而更能准确地反映组织细胞的功能状态有噬菌体介导细菌检测将荧光素酶基因引入到噬菌体的基因组，然后用转基因噬菌体去侵染待测样品噬菌体侵染该宿主菌，大量合成包括荧光素酶在内的由噬菌体基因编码的蛋白，向体系中加入荧光素和ATP，就会有荧光产生结核菌的检测抗药性菌株的检测荧光素酶荧光素＋ATP荧光利用宿主细胞转录、翻译噬菌体基因荧光素酶基因宿主细菌噬菌体介导的细菌检测第三节DNA指纹每个人体细胞内都含有23对染色体，每条染色体中部含有一个DNA分子，DNA分子中的核苷酸序列包含着遗传信息，在DNA分子中存在三种类型：单拷贝序列、中等程度重复序列、高度重复序每个重复序列在300个核苷酸长度之内，由于高度重复，序列经过超离心后以卫星带出现在主要DNA带的附近，所以也称卫星DNA，其中的重复序列单元则称为“小卫星DNA”“小卫星”具有高度的可变性，但在“小卫星DNA“中有一小段序列则在所有个体中都一样，称为“核心序列”。如果把核心序列串联起来作为分子探针与不同个体的DNA进行分子杂交，就会出现各自特有的杂交图谱。它们与人的指纹一样具有专一性和特异性，因此称作“DNA指纹”通过对人类基因组的解析，发现人与人之间99．99％的碱基序列都相同，而剩下的0.01%的碱基特征序列则来自于双亲，据此可用于“亲子鉴定”所罗门的审判：大家都听说过所罗门的审判这样一件故事：两位妇人都声称自己是孩子的母亲，于是所罗门就命令一名侍卫把那个孩子带来，要用剑将其辟成两半分给他们两，结果假母亲同意所罗门的判决，而孩子真正的母亲却恳求侍卫饶了孩子的性命，她解释说：“把孩子给了假母亲，总比让孩子惨死好。”当然，真假母亲也就水落石出了。滴骨验亲法：以生者的血滴在尸骨上，观察血能否浸入骨内，浸入的则被认为两者有血缘关系，在各种古籍中有多种记录。三国时代（公园220—280年）谢承著《会稽先贤传》中的《以弟血滴兄骨》可能是记录此法的最早的史料：陈业的哥哥因海难不幸殒命，当时一同遇难的有五六十人，并且尸体都已严重腐败而无法辨认死者的身份。陈业就用刀刺破自己的手臂将血分别滴在尸骨上，发现其血液只能浸入一具尸骨，其余皆不能。陈业就这样确认其兄的尸骨。合血法：等到了明代，更是采用了“合血法”来识别亲权。明末清初的检验书籍中都有相同的记载：“亲子兄弟或自幼分离，欲相认识。难辨真伪。命各刺出血，滴一器内，真则共凝为一，否则不凝也。”方法：DNA指纹是指对待测样品中的DNA进行分析所得到的具有特征性的DNA分子杂交图谱DNA酶解电泳转膜杂交最常用的DNA探针是微卫星序列受害者血样犯罪嫌疑人衣物上血样犯罪嫌疑人血样第四节遗传性疾病的分子诊断技术直接诊断点突变间接诊断多态性连锁分析美国前副总统汉弗莱Humphrey)在1967年发现膀胱内有一肿物，病理切片未发现癌细胞良性“慢性增生性囊肿”，未进行手术治疗。九年后，他被诊断为患有“膀胧癌”，两年后死于该病。1994年，研究者用灵敏的PCR技术对上述汉弗莱1967年的病理切片进行了P53抑癌基因检查，发现那时的组织细胞虽然在形态上还没有表现出恶性变化，但其P53基因的第227个密码子已经发生了一个核苷酸的突变。就是这个基因的微小变化，使其抑癌功能受损，导致九年后细胞癌变的发生。这说明，在典型症状出现之前的很长时间，细胞癌变的信息已经在基因上表现出来了P53抑癌基因遗传性疾病的分子诊断技术PCR－酶解鉴定PCR／OLA鉴定PCR-ELISA检测PCR-DGGE鉴定扩增阻滞突变系统（lificationrefractorymutationsystem,ARMS）连接酶链反应（LCR）镰刀形细胞贫血症(sickle-cellanemia)典型的单基因遗传性疾病血红蛋白的β链（β珠蛋白）的第六个氨基酸Glu发生突变成Val血红蛋白?-链上