革兰氏染色和抗酸染色法.ppt

关于革兰氏染色和抗酸染色法革兰染色法革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家汉斯·克里斯蒂安·革兰（HansChristainGran）创立的。第2页,共23页，2024年2月25日，星期天实验目的和要求1.掌握革兰氏染色方法的操作步骤及注意事项。2.了解革兰氏染色的临床意义。第3页,共23页，2024年2月25日，星期天一、实验原理二、实验器材三、操作步骤四、注意事项五、革兰染色的临床意义第4页,共23页，2024年2月25日，星期天（一）基本步骤：1、初染：草酸胺结晶紫染色2、媒染：碘液媒染3、脱色：乙醇脱色4、复染：石炭酸复红复染一、实验原理第5页,共23页，2024年2月25日，星期天细菌对革兰氏染色的不同反应是由于它们细胞壁的成分和结构不同而造成的。初染后，所有细菌都被染成初染剂的蓝紫色。碘作为媒染剂，它能与结晶紫结合成结晶紫—碘的复合物，增强染料与细菌的结合力。（二）原理：第6页,共23页，2024年2月25日，星期天当用脱色剂处理时，G+菌的细胞壁主要由肽聚糖形成的网状结构组成，壁厚、类脂质含量低，用乙醇脱色时细胞壁脱水，使肽聚糖层的网状结构孔径缩小，透性降低，从而使结晶紫—碘的复合物不易被洗脱而保留在细胞内，经脱色和复染后仍保留初染剂的蓝紫色。G-菌则不同，由于其细胞壁肽聚糖层较薄、类脂质含量高，所以当脱色处理时，类脂质被乙醇溶解，细胞壁透性增大，使结晶紫—碘的复合物比较容易被洗脱出来，用复染剂复染后，细胞被染上复染剂的红色。第7页,共23页，2024年2月25日，星期天细胞保留初染剂蓝紫色的细菌为G+菌；细胞中初染剂被脱色剂洗脱而染上复染剂的颜色（红色）的细菌为G-菌。G-G+第8页,共23页，2024年2月25日，星期天二、实验器材大肠杆菌，金黄色葡萄球菌，革兰氏染色液，生理盐水，载玻片，接种环，显微镜等。第9页,共23页，2024年2月25日，星期天三、操作步骤第10页,共23页，2024年2月25日，星期天1、涂片：将大肠杆菌和金黄色葡萄球菌分别涂片、干燥、固定。2、染色：（1）初染：加草酸铵结晶紫一滴，约一分钟，水洗（2）媒染：滴加碘液冲去残水，并覆盖一分钟，水洗（3）脱色：将水甩净，并衬以白背景，用95%乙醇滴洗至刚刚无紫色为止，约20—30秒，立即用水冲净乙醇（4）复染：用番红液染1--2分钟，水洗3、镜检：干燥后，油镜观察。以分散开的细菌颜色为准，革兰氏阳性菌呈紫色，革兰氏阴性菌呈红色。第11页,共23页，2024年2月25日，星期天四、注意事项第12页,共23页，2024年2月25日，星期天1、注意涂片不宜过于浓厚。

2、火焰固定温度要适宜。

3、革兰氏染色成败的关键是酒精脱色。如脱色过度，革兰氏阳性菌也可被脱色而染成阴性菌；如脱色时间过短，革兰氏阴性菌也会被染成革兰氏阳性菌。脱色时间的长短还受涂片厚薄及乙醇用量多少等因素的影响，难以严格规定。

4、染色过程中应吸去玻片上的残水，以免染色液被稀释而影响染色效果。

5、选择幼龄的细菌。G+菌培养12-16h，E.coli培养24h。若菌龄太老，由于菌体死亡或自溶常使G+菌转呈阴性反应。第13页,共23页，2024年2月25日，星期天五、革兰染色的临床意义1.对细菌的鉴别有重要意义2.指导临床选择用药3.研究细菌与致病性的关系第14页,共23页，2024年2月25日，星期天思考题：

当你对一株未知菌进行革兰染色时，怎样能确证你的染色技术操作正确，结果可靠？

第15页,共23页，2024年2月25日，星期天抗酸染色法第16页,共23页，2024年2月25日，星期天【原理】结核杆菌对苯胺染料不易着色，若加温或延长染色时间使其着色后，再用3%盐酸酒精处理也不易脱色，再经美兰复染，结核杆菌及其它分枝杆菌仍呈红色，而非抗酸菌和细胞杂质等呈蓝色。第17页,共23页，2024年2月25日，星期天【材料】①结核病人的咳痰液：采取清晨第一口粘痰，或浓缩集落菌法处理过的痰标本。②石炭酸复红染色液，3%盐酸酒精，碱性美蓝染液③生理盐水④载物玻片，滤纸片、接种环、玻片夹、酒精灯、蜡笔等第18页,共23页，2024年2月25日，星期天【方法】1．涂膜痰的涂片：用灭菌的接种环采取痰中干酪坏死的小块或带血的痰液，在载玻片上涂成薄而均匀的膜（在烧