尼古丁对人脐带间质干细胞及肺癌细胞株A549生物学特性影响的研究.docVIP

尼古丁对人脐带间质干细胞及肺癌细胞株A549生物学特性影响的研究

目的:通过实验探讨不同浓度的尼古丁对人脐带间质干细胞(humanumbilicalcordmesenchymalstemcell,hUC-MSC)以及肺癌细胞株A549生物学特性的影响来说明其对人体的潜在危害,以期完善尼古丁、间质干细胞和肿瘤之间的关系,为预防和治疗吸烟相关疾病提供实验依据。方法:(1)采用贴壁法分离培养hUC-MSC,利用形态学特征、成骨成脂多向分化潜能和相关基因表达以及表面抗原标记的检测对其进行鉴定。

(2)利用MTT法检测尼古丁对hUC-MSC增殖能力的影响,通过浓度梯度筛选出0.1mg/ml、0.2mg/ml和0.3mg/ml作为后续实验的使用浓度;Transwell实验来检测不同浓度的尼古丁对hUC-MSC迁移能力的影响;流式细胞分析仪检测尼古丁对hUC-MSC周期和凋亡的影响;Westernblot和免疫荧光检测不同浓度的尼古丁对hUC-MSC相关蛋白的表达。(3)用0.3mg/ml的尼古丁预处理hUC-MSC24h后与肺癌细胞株A549共培养24h。

(4)通过Transwell实验和划痕实验来检测共培养后的肺癌细胞株A549的迁移能力。(5)用共培养后的肺癌细胞株A549进行裸鼠皮下成瘤实验来评价共培养后的细胞的致瘤能力。

(6)对瘤体进行HE染色和免疫组化分析。结果