高中生物选修一粗提取与鉴定.ppt

关于高中生物选修一粗提取与鉴定一、基础知识：提取DNA的方法（1）DNA和蛋白质等成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同；（0.14mol/L的NaCl溶液,DNA溶解度最低，析出）选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解，而杂质沉淀，或者相反；1、DNA的溶解性（2）DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精，利用这一原理，可以将DNA与蛋白质进一步分离。第2页,共10页，2024年2月25日，星期天一、基础知识：提取DNA的方法（1）蛋白酶：水解蛋白质，不能水解DNA。（2）高温：大多数蛋白质不能忍受60－80℃的高温，而DNA在80℃以上才会变性。（3）洗涤剂：瓦解细胞膜（主要破坏膜中的蛋白质分子），但对DNA没影响。2、DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性第3页,共10页，2024年2月25日，星期天（1）二苯胺：

沸水浴条件下，DNA遇二苯胺沸水浴5min会染成蓝色（2）甲基绿：将

DNA染成绿色3、DNA鉴定原理第4页,共10页，2024年2月25日，星期天二、实验设计原则上只要含DNA的生物材料都可以，但是选取DNA含量相对较高的生物组织，成功率更大。（一）实验材料的选取本实验材料：新鲜鸡血细胞液和鸡全血相比，鸡血细胞液中DNA相对含量高，保证实验能提取到足够量的DNA。第5页,共10页，2024年2月25日，星期天二、实验设计（二）破碎细胞，获取含DNA的滤液1.动物细胞：加蒸馏水

使细胞吸水胀破，玻璃棒搅

拌可加速细胞膜和核膜破裂，

过滤后收集滤液2.植物细胞：切碎后加洗涤剂和食盐，然后充分搅拌、研磨，过滤后收集滤液；（P55问题）第6页,共10页，2024年2月25日，星期天二、实验设计（三）去除滤液中的杂质方案3：控制温度在60~75℃方案2：滤液中加嫩肉粉（木瓜蛋白酶）方案1：控制NaCl溶液的浓度，反复地 溶解与析出DNA，去除杂质第7页,共10页，2024年2月25日，星期天前面处理后的溶液过滤，加与滤液体积相等的、冷却的酒精溶液(体积分数95％)，静置2－3min，溶液中会出现白色丝状物——粗提取DNA用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸取上面的水1、DNA的析出（进一步提纯DNA）（四）DNA的析出与鉴定第8页,共10页，2024年2月25日，星期天2.DNA的鉴定⑴向两支试管中分别加入2mol/LNaCl溶液5ml⑵其中一支试管中加DNA丝状物⑶各加入二苯胺试剂4ml⑷混匀后，沸水浴中加热5min⑸待冷却后，比较两只试管中溶液的颜色变化观察现象：溶解丝状物的溶液变为蓝色（四）DNA的析出与鉴定第9页,共10页，2024年2月25日，星期天感谢大家观看第10页,共10页，2024年2月25日，星期天********************************