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小核酸药物

RNA治疗的崛起，突破“不可成药”限制

种类多样-生产制备工艺相对简单-不易产生耐药性

药效持久-候选靶点丰富-适应症范围广-研发周期短

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MasterofBioactiveMolecules

小核酸药物

传统的药物治疗方法依赖于小分子化合物靶向靶蛋白的活性结合位点以抑制或改变靶蛋白的功能。但是小分子化合物的靶点是有限的。然而，只有10-14%的蛋白具有活性结合位点，绝大多数的蛋白无法成为小分子化合物的

靶点[1]。一些疾病面临无药可治的困境，例如，使用丙戊酸、沙丁胺醇、利鲁唑等药物治疗脊髓性肌萎缩症（一种常染色体隐性退行性神经肌肉疾病，以脊髓运动神经元缺失导致肌肉无力为特征）的治疗效果并不理想[2]。而小核酸药物的迅速发展帮助解决了这一难题。反义寡核苷酸Nusinersen(Spinraza?)在2016年获批上市，成为目前唯一被批准用于治疗脊髓性肌萎缩症的药物[2]。

小核酸药物是由序列经过特定设计的核苷酸构成。绝大多数小核酸药物通过互补碱基配对结合靶基因mRNA或pre-mRNA，理论上可以选择性地调控任何靶基因和蛋白的表达，包括很多传统药物无法成药的靶点。这意味着小核酸药物有潜力用于很多发病机制尚不清楚的罕见病。此外，小核酸药物还具有生产制备工艺相对简单、研发周期短、药效持久等优势。

目前常见的小核酸药物包括反义寡核苷酸(AntisenseOligonucleotides,ASO)、SiRNA(SmallInterferingRNA)、microRNA和核酸适配体(Aptamer)[1][2]。

反义寡核苷酸通常指通过化学合成的短单链DNA或RNA(13-30个核苷酸长度)[4][5]。反义寡核苷酸与靶向的mRNA或pre-mRNA结合后，通过几种不同的机制调节RNA的功能[5][6][7]。

1.ASOs可以形成RNA-DNA混合物，成为RNaseH的底物，导致靶向mRNA降解。

2.反义寡核苷酸与成熟mRNA结合阻止其附着在核糖体上，核糖体空间位阻引起的翻译阻滞，从而导致表达减少。

3.反义寡核苷酸与pre-mRNA结合可以改变剪接因子的招募，调节剪接事件。

ASO:~6kDa

RNAaseH1

Ribosome

Splice

repressor

RNAaseH1-mediated

mRNAsilencing

Translationarrestby

Splicingmodulationby

blockingtheribosome

splicerepressorocclusion

Figure1.TheexpandinguniverseoftherapeuticRNApayloads[7].

SiRNA是一种小的外源性双链RNA(dsRNA)，约有20-25个核苷酸长度，可以触发RNA干扰机制。短双链RNA解旋后正义链被降解。反义链与多种蛋白组分形成RNA诱导的沉默复合体(RNAInducedSilencingComplex,RISC)。RISC中保留的反义链与靶基因的mRNA特异地互补，同时RISC具有核酸酶活性，能将靶基因的mRNA切割降解，抑制靶基因的表达。如果不完全互补，则导致mRNA翻译抑制[6]。

MicroRNA(miRNA)是一种短的单链RNA(约21个核苷酸)，在细胞质中介导基因沉默是其主要功能。miRNA常与靶基因mRNA的3端非编码区结合。大多数动物miRNA与mRNA的配对是不完美的，存在错配和凸起结合，导致mRNA的翻译过程被抑制。相反，大多数植物miRNA与它们靶基因mRNA的位点具有近乎完美的互补结合。在这种情况下，靶基因的mRNA被切割并降解。由于miRNA通过低互补性发挥作用，因此，它们可能同时具有多个靶

点[8][9]。

RNApolymerase

DNA

mRNA

shRNAdsRNA

Dicer

Guidestrand

Passengerstrand

siRNA RISC

Loading

Passengerstrandiscleaved

(afterloading)

siRISC

AGO

mRNA5’

TargetmRNAissliced

degraded,translation

repression

Nucleus

pri-miRNA

Drosha

Cyto