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特殊食品和化妆品减脂功效测试秀丽隐杆线虫法

1范围

本文件规定了运用秀丽隐杆线虫（Caenorhabditiselegans，以下简称“线虫”）对特殊食品和化妆

品进行减脂功效测试的方法。

本文件适用于特殊食品和化妆品减脂功效的测试，特殊食品和化妆品的原料可参考本方法执行。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

DB35/T2132—2023实验用秀丽隐杆线虫饲育技术

T/GDCA013—2022化妆品抗氧化活性的评价秀丽线虫法

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4符号和缩略语

下列符号和缩略语适用于本文件。

CAS：CAS登录号（CASRegistryNumber）

CI：空白对照组平均总强度值（IntensityofBlankControlGroup）

IL：脂质抑制率（InhibitionRateofLipid）

LB：溶菌肉汤（Luria-Bertani）

NGM：线虫生长培养基（NematodeGrowthMedium）

OP50-NGM：含有尿嘧啶合成缺陷型大肠杆菌的线虫生长培养基（EscherichiacoliOP50on

NematodeGrowthMedium）

P：P值（Pvalue）

SI：样品组平均总强度值（IntensityofSampleGroup）

t-test：T检验（Student’sttest）

5检测原理

油红O是一种脂溶性二唑染料，可与线虫的中性脂质和胆固醇酯特异性结合而着色。线虫通身透明，

可以通过观测油红O在线虫体内的着色水平来判断其脂肪含量。利用ImageJ2软件处理线虫的油红着

色样图即可进行定量分析。

6材料与试剂

6.1材料

所需材料如下：

——线虫、尿嘧啶合成缺陷型大肠杆菌（EscherichiacoliOP50，E.coliOP50）；

——挑虫器；

——培养皿；

1

——移液枪。

6.2试剂

除非另有说明，化学试剂使用符合国家标准的分析纯试剂。配制方法见附录A及DB35/T2132—2023。

油红O（CHNO）、氯化钠（NaCl）、氯化钙（CaCl）、硫酸镁（MgSO）、氯化钾（KCl）、

2624424

磷酸氢二钾（KHPO）、磷酸二氢钾（KHPO）、二甲基亚砜（DMSO）、无水乙醇、胆固醇、琼脂

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粉（Agar）、LB、蛋白胨、异丙醇、免疫染色通透液（TritonX-100）、磷酸缓冲盐溶液（PBS缓冲液）。

6.3阳性对照品

奥利司他标准品（Orlistat），纯度≥98％，CAS：96829-58-2。

7实验仪器与设备

所需仪器与设备如下：

——体视显微镜，放大倍数5倍～50倍；

——恒温培养箱，精度±1℃；

——洁净工作台；

——万分之一天平，精度0.1mg；

——高压灭菌锅；

——高速离心机；

——恒温摇床；

——旋转混匀仪；

——﹣20℃冰箱；

——光学显微镜，物镜变倍不小于10倍。

8测试方法

8.1受试样品处理

配制受试样品测试母液时，若受试样品为水溶性物质，则使用无菌双蒸水作为溶剂；若受试样品为

非水溶性物质，可选用DMSO作为溶剂。

8.2线虫NGM制备

8.2.1空白对照组NGM的配制

空白对照组NGM的配制按照DB35/T2132—2023的相关规定执行。

8.2.2受试样品组NGM的配制

受试样品组NGM的配制按照T/GDCA013—2022的相关规定执行。

8.2.3阳性对照组NGM的配制

阳性对照奥利司他组：用DMSO配制成6mg/mL母液，