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DNS法测还原糖方法

一原理

DNS即二硝基水杨酸法是利用碱性条件下，二硝基水杨酸（DNS）与还原糖发生氧化还原

反应，生成3-氨基-5-硝基水杨酸，该产物在煮沸条件下显棕红色，540nm处有吸收，且在

一定浓度范围内颜色深浅与还原糖含量成比例关系的原理，用比色法测定还原糖含量的。

二试剂及方法

2.1试剂

1.1mg/ml的葡萄糖溶液

2.3,5－二硝基水杨酸

用400mL蒸馏水溶解6.3g3，5—二硝基水杨酸，逐步加入21g氢氧化钠，再加入

182g四水合酒石酸钾钠、5.0g苯酚、5.0g无水亚硫酸钠，温水浴(不超过48℃)，不断搅

拌，直至溶液清澈透明。用蒸馏水定容至1000mL，保存在棕色瓶中，与二氧化碳隔绝，

静置5～7天后使用，贮存期为6个月。

2.2葡萄糖标曲的绘制

表1葡萄糖标曲的绘制方法

试管

试剂

012345

葡萄糖标准液(ml)00.10.20.30.40.5

蒸馏水(ml)0.50.40.30.20.10

3,5-二硝基水杨酸(ml)0.50.50.50.50.50.5

糖含量（mg）00.10.20.30.40.5

混合均匀，沸水浴5min，冷却后加入4mL蒸馏水，混匀，在540nm下测OD值

2.3发酵液样品测定

将发酵液稀释一定倍数后，取3只比色管标号1,2,3，加入稀释和的发酵液0.5ml，加入DNS

试剂0.5ml混匀，沸水浴5min，冷却后加入4ml蒸馏水混匀，测OD

540

表2样品的测定方法

管号012

还原糖待测样品（mL）0.00.50.5

蒸馏水（mL）0.50.00.0

DNS试剂（mL）0.50.50.5

蒸馏水（mL）444

A

540nm

计算所得还原糖含量（mg）

三结果计算

3.1标曲

3.2样品的还原糖含量

计算得到的还原糖量（mg）

还原糖含量（g/L）稀释倍数

加人样品的体积（0.5ml）