TCPMA 032-2023 病原微生物菌（毒）种分离和鉴定方法 施万菌.docxVIP

ICS11.020

CCSC04

团 体 标 准

T/CPMA032—2023

病原微生物菌（毒）种分离和鉴定方法施万菌

Isolationandidentificationofpathogenicmicroorganisms—Shewanellaspp.

2023-10–20发布 2023-10-20实施

中华预防医学会 发布

T/CPMA032

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I

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II

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目 次

前 言 II

1范围 1

2规范性引用文件 1

3术语和定义 1

4缩略语 1

5设备和材料 1

6培养基和试剂 1

7分离和鉴定程序 2

8操作步骤 3

样品类型和处理 3

增菌 3

分离培养 3

初步鉴定 3

微生物自动鉴定系统实验 4

PCR确证实验 4

附录 A（资料性）施万菌病原学 7

附录 B（规范性）设备和材料 8

附录 C（规范性）培养基和试剂 9

施万菌增菌液 9

硫代硫酸盐柠檬酸盐胆盐蔗糖（TCBS）琼脂 9

营养琼脂 9

三糖铁琼脂（TSI） 9

氧化酶试剂 10

C.65×TBE电泳缓冲液 10

附录 D（规范性）施万菌种水平的鉴定（MLSA法） 11

D.1核酸模板制备 11

D.2PCR反应体系 11

D.3PCR扩增条件 11

D.4扩增产物分析 11

D.5构建MLSA进化树 11

D.6结果判定 12

参 考 文 献 13

前 言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由中国疾病预防控制中心传染病预防控制所提出。

本文件由中华预防医学会归口。

本文件起草单位：中国疾病预防控制中心传染病预防控制所、马鞍山市疾病预防控制中心、中国疾病预防控制中心、中日友好医院、北京市顺义区疾病预防控制中心。

本文件主要起草人：王多春、汪永禄、魏强、卢金星、阚飙、鲁炳怀、李颖、朱明、姜孟楠、代航、蔡红艳、肖悦、高鹤、白雪梅。

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病原微生物菌（毒）种分离和鉴定方法施万菌

范围

本文件规定了施万菌的分离和鉴定方法。

本文件适用于全国各级病原微生物菌（毒）种保藏机构，以及涉及人间传染的施万菌研究、教学、检测、诊断等相关活动的机构。

规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

T/CPMA011病原微生物菌（毒）种保藏数据描述通则

术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

施万菌属 Shewanellaspp.

革兰染色阴性菌、具有单极鞭毛、兼性厌氧，主要生化特征为氧化酶、过氧化氢酶阳性，可产H2S，广泛分布于海洋环境和水生生物中，可造成海产品、禽畜肉制品腐败，是水生动物和人类的机会致病菌，在人体可导致皮肤和软组织感染、菌血症、肝胆疾病、中耳炎和其他感染。

注：详细资料参见附录A。

缩略语

下列缩略语适用于本文件。

bp：碱基对（Basepair）

MLSA：多位点序列分析（MultilocusSequenceAnalysis）PCR：聚合酶链式反应（PolymeraseChainReaction）

设备和材料

见附录B。

培养基和试剂

见附录C。

分离和鉴定程序

分离和鉴定流程见图1。

直径1-3mm

直径1-3mm、圆形、光滑凸起、绿色不透明，带或不带黑色中心

初步鉴定：革兰染色（-

初步鉴定：革兰染色（-），氧化酶（+），三糖铁琼脂反应为斜面产碱、底层产酸、产硫化氢

报告检出施万菌

报告检出施万菌

MLSA分析（种水平鉴定，可选）

MLSA分析（种水平鉴定，可选）

样品处理

增菌：施万菌增菌液样品（临床、食品、环境）分离培养：TCBS平板36℃±1℃，18h

增菌：施万菌增菌液

样品（临床、食品、环境）

分离培养：TCBS平板

36℃±1℃，