血清白蛋白的分离纯化及鉴定(一)-盐析、G-25脱盐、G-75层析.pptVIP

血清白蛋白分离与纯化实验目的1.了解血清蛋白质分离的一般方法2.掌握盐析法、凝胶层析分离纯化白蛋白的方法实验原理血清中主要蛋白：白蛋白与球蛋白正常人血清中总蛋白、白蛋白、球蛋白的量保持相对恒定；总蛋白60-80克/升，白蛋白为40-50克/升，球蛋白为20-30克/升。盐析法中性盐类能破坏溶液中蛋白分子表面的双电子层和水膜，从而使蛋白质从溶液中凝聚沉淀析出。利用白蛋白和球蛋白在高浓度中性盐溶液中(常用硫酸铵)溶解度的差异而进行沉淀分离，此为盐析法。血清白蛋白在饱和硫酸铵溶液中沉淀析出，血清球蛋白在半饱和硫酸铵溶液中沉淀析出。凝胶层析1、凝胶层析也称凝胶过滤，是一类利用有一定孔径范围的多孔凝胶的层析技术，是一种分子筛效应。2、当样品流经这类凝胶的固定相时，不同分子大小的各组分因进入网孔受阻滞的程度不同而以不同的速度通过层析柱，从而达到分离的目的。凝胶层析3、当样品通过层析柱时，分子量较大的物质因为不能或较难通过网孔而进入凝胶颗粒间隙，沿着凝胶颗粒间的间隙流动，所以流程较短，向前移动的速度较快，即受阻滞的程度较小，最先流出层析柱；反之，分质量较小的物质（硫酸铵），因为颗粒直径较小，可通过网孔而进入凝胶颗粒，所以流程较长，向前移动的速度较慢，即受阻滞的程度较大，流出较晚。实验步骤-硫酸铵盐析取正常人血清2.0ml于小试管中，边摇边缓慢滴加饱和硫酸铵溶液